apelin13诱导hepg2细胞自噬中erk12及beclin1表达的分析的影响 word格式.docxVIP

主要英文缩略语索引缩略语英文全称中文译名ApelinAPJAPJendogenousligandPutative receptor proteinrelatedAPJ内源性配体to the angiotensin receptorAT1血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ相关受体蛋白DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜ERK1/2 pERK1/2Extracellularsignal-regulated kinasel1/2 PhosphorylationofExtracellularsignal-regulated kinasel1/2细胞外信号调节激酶1/2磷酸化细胞外信号调节激酶1/2FBSFetal bovine serum胎牛血清PAGEPolyacrylamidegel electrophroesis聚丙烯酰胺凝胶电泳PVDFPolyvinylidene fluoride聚偏二氟乙烯SDSSodiumdodecyl sulfate十二烷基硫酸钠PMSFRT-PCRPhenylmethylsufonyl fluorideReverse-transcription Polymerase苯甲基磺酰氟逆转录聚合酶链反应Chain ReactionTrisWBTrish（hydroxymenthyl）aminomenthaneWestern blot三羟甲基氨基甲烷蛋白质印迹1211Apelin-13诱导HepG2细胞自噬中ERK1/2及Beclin1表达的研究摘要目的：Apelin-13处理肝癌HepG2细胞，对ERK1/2、pERK1/2及Beclin1表达的影响，探讨激活肝癌HepG2细胞中的ERK1/2信号途径对自噬基因Beclin1 表达的影响。方法：1.HepG2细胞培养及分组：培养人肝癌细胞株HepG2，取对数生长期细胞用于实验。实验细胞分为Apelin-13组及PD98059组两大组，其中Apelin-13组中分别为：对照组（10%FBS）、0.0001μmol /L 组、0.001μmol/L组、0.01μmol/L 组、0.1μmol/L组。PD98059组中分别为：对照组（10%FBS）、Apelin-13（0.1 μmol/L）组、Apelin-13（0.1μmol/L）+PD98059（10μmol/L）、PD98059（10 μmol/L）组、DMSO(溶媒)组。Westernblot法：检测Apelin-13、ERK1/2抑制剂PD98095分别处理肝癌HepG2细胞后对ERK1/2 的磷酸化改变及Beclin1 的蛋白表达。RT-PCR法：检测Apelin-13、ERK1/2 抑制剂PD98095分别处理肝癌HepG2细胞后对Beclin1的mRNA表达。4.MDC 荧光染色法：荧光倒置电子显微镜观察不同处理条件下的肝癌HepG2细胞的自噬小体的生成情况。结果：1.用Apelin-13 在0μmol /L、0.0001μmol /L、0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L五种浓度处理肝癌HepG2细胞24h 后，pERK1/2蛋白的相对表达量分别是：0.445 ± 0.021, 0.764 ± 0.013, 0.857 ± 0.018, 0.906 ± 0.072, 1.019 ± 0.041；Beclin1 蛋白的相对表达量分别是：0.354±0.010、0.734±0.017、1.080±0.068、1.092±0.014、1.168±0.024；Beclin1 mRNA的相对表达量分别是：0.466±0.095、0.737±0.038、1.246±0.038、1.370±0.039、1.522±0.034；以上结果中实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)，且实验组两两比较有统计学差异(P0.05)；2Apelin-13对ERK1/2的表达无明显影响。随着Apelin-13浓度的升高，肝癌HepG2细胞中被MDC 染色的呈现蓝绿色荧光颗粒的自噬小体越多。2.Apelin-13处理肝癌HepG2细胞后加入ERK1/2抑制剂PD98059处理肝癌HepG2细胞后，pERK1/2 蛋白的相对表达量分别是：1.169±0.010、1.511±0.044、1.1435±0.041、0.955±0.023、1.087±0.053；Beclin1 蛋白的相对表达量分别是：1.009±0.045、1.590±0.010、1.155±0.039、0.889±0.024、1.141±0.018；Beclin1 mRNA的相对表达量分别是:1.068±0.056、1.582±0.017、1.132±0.028、0.917±0.023、±0.008。以上结果中Apelin-13