ghrelin mrna在小鼠体内早期胚胎发育中表达 word格式.docxVIP

2.2.4小鼠各个时期胚胎细胞总 RNA 的提取 19总 RNA 的检测 20RT-PCR 反应 202.2.7引物的设计与合成 ......................................... 212.2.8实时荧光定量 RT-PCR 反应 212.2.10统计分析进行实验数据处理 ................................ 243结果 ........................................................... 253.1总 RNA 的检测 253.2实时荧光定量 PCR 结果 25ghrelin 和 GAPDH 荧光定量 RT-PCR 扩增曲线和熔解曲线 25ghrelin 和 GAPDH 基因表达的荧光定量 RT-PCR 扩增效率曲线 263.3荧光定量 PCR 产物电泳检测及基因测序 273.3.1荧光定量 PCR 产物电泳检测结果 273.3.2实时荧光定量 PCR 产物结果测序 283.4体内不同培养时间的胚胎细胞 Ghrelin mRNA 相对表达量 294讨论 ........................................................... 295结论 ........................................................... 31致谢 .......................................................... 32参考文献 .................................................... 33附录 .......................................................... 39作者简介 .................................................... 41缩略词Ghrelin 生长素GHS（Growth hormone secretagogue） 生长激素促分泌素GPCR（G protein-coupled receptor） G-蛋白偶联受体 GHS-R（Growth hormone secretagogue receptor） 生长激素促分泌素受体 GHSs(growth hormone secretagogues ) 生长素促泌物GH(Growth hormone) 促生长激素PCR(Polymerase chain reaction ) 聚合酶链式反应 RQ-PCR(Real-time quantitative PCR) 实时荧光定量 PCR mRNA( Message RNA ) 信使 RNAPBS( Phosphate buffered saline ) 磷酸缓冲液 RT-PCR(Reverse transcription-polymerase chain reaction) 反转录聚合酶链式反应 BSA(Bovine serum albumin) 牛血清蛋白PMSG(Pregnant Mare Serum Gonadotropin) 血清促性腺激素 hCG( human chorionic gonadotrophin) 人绒毛膜促性腺激素 GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) 甘油醛-3-磷酸脱氢酶1引言Ghrelin 是 1999 年由 Kojima 等人发现的第一个内源性生长激素促分泌剂 GHSs 受体的配体[1]，最初是从昆明系大白鼠(Rattus norvegicus albus)胃组织的内分泌细胞中 分离、提取出来，具有调节 GH 的分泌、摄食、能量代谢、内分泌、睡眠、记忆、胃 肠功能等多种生物学作用[2]。因此 Ghrelin 生理和病理的意义成为目前研究的热点问 题之一。Ghrelin 的发现及命名生长激素（Growth hormone ，GH）是由脑垂体释放的一种能够调控动物生长的 激素，它的释放主要是由促生长激素释放激素（GHRH）和生长抑制素（SS）两种进 行调控的[3]。从 20 世纪七八十年代开始，人们陆续发现许多人工合成的小分子肽能够促进生 长的激素，包括 GHRP-6 、GHRP-1 、GHRP-2 和 hexeralin 以及一些非肽类物质如 L-692 、429 和 MK0677 等在体内外均可促进生长激素（Growth hormone ，GH）的 分泌[4]，并将这类人工合成的物质统称为生长素促泌物(growth hormone secretagogues， GHSs)