表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制分析-外科学;骨科专业论文 word格式.docxVIP

英文缩写词表英文缩写英文全称中文名称EpSCs LIPEMF DMEMK-SFMepidermalstemcellsLow-intensitypulsed electromagneticfields Dulbeccosmodified eaglesmediumKeratinocyte-SerumFreeMedium表皮干细胞低频电磁场达尔伯克培养基角质形成细胞无血清培养基CK19 DEPC SP PBS FBS PCR RTFITCCytokeratin 19 diethylpyrocarbonateneuropeptidesubstanceP PhosphateBufferSolution Fetalblood Serum polymerasechain reactionreversetranscriptionfluoresceinisothiocyanate细胞角蛋白19二乙基焦磷酞胺感觉神经肽p 物质磷酸盐缓冲液胎牛血清聚合酶链式反应逆转录异硫氰酸荧光素前言表皮干细胞（epidermalstemcells，EpSCs）是皮肤及其附属器发生、修复、改建过程中必不可少的细胞[1,2]，在创面愈合过程中表皮干细胞同样扮演着重要角色。研究EpSCs增殖、分化及其调控机制，对于促进皮肤结构和功能的生理性修复，构建具有皮肤结构和功能的人工皮肤都具有重要意义。表皮组织的自我更新和损伤修复均依靠EpSCs代偿性的增殖和定向分化来完成[3-5]。但是EpSCs是如何在保证源源不断的产生终末分化细胞来补充表皮代谢和修复需要，同时保持自身干细胞库的稳定，即自我更新？实际上，干细胞的自我更新与分化之间的平衡是通过两种细胞分裂方式达到的：不对称分裂和群体不对称分裂[3]。在这种不对称的分裂中，每个EpSCs均产生一个干细胞和一个非干细胞的子代细胞，而在群体不对称分裂中，每个细胞的单个分裂的结果是不确定的：子代细胞可能全是干细胞，也可能全是分化的子细胞，还有可能是上述所说的不对称分裂。但调控这两种分裂方式的分子机制是什么还没有完全研究清楚。目前认为调节EpSCs增殖及分化功能的几个已知分子网络及信号通路都起着重要的作用，这其中Wnt(/β-catenin)信号通路在EpSCs的增殖、分化过程中发挥着重要的作用[6,7]；而随着一些学者在诱导多能干细胞（iPS）方面的研究取得的突破[8-10]，使我们认识到了一些转录因子如Nanog、SOX2、OCT4等会有很多其他的作用。自从2003 年Chambers等和Mitsui等分别发现了这一个新的转录因子以来[10-12]，Nanog在很多细胞中的作用都被大家所研究，如Nanog在肿瘤干细胞中的所起的作用已经被多数学者证实[13-15]，而且Nanog在维持干细胞的自我更新和多向分化潜能方面的作用也是惊人的[16-18]。缺少了此基因，将造成干细胞群进入集体分化状态，最后造成干细胞库的消失[18]。在表皮干细胞这个成体干细胞当中，Nanog是否也发挥作用，目前还没有文献报道，这就给我们的研究提供了一个崭新的思路。在表皮干细胞的自我更新及分化方面Wnt/β-catenin信号通路的作用已经被很多学者证实。Wnt信号通路主要包括3条分支：（1）经典通路，Wnt/β-catenin信号通路。此通路是通过激活细胞质内的β-catenin使其增加，增加的β-catenin随即进入细胞核，与核内的转录因子结合，共同激活信号下游基因完成信号传导作用[7,19]。（2）Wnt/JUN激酶途径，这个也叫平面细胞极性通路，PCP通路。主要就是指通过调控细胞骨架，来改变细胞的形态和运动。（3）Wnt/Ca2+通路，此通路是通过分泌Wnt5a蛋白和Wnt11 因子来激活，从而来激活一系列的激酶，使得钙离子的释放，进而使细胞内钙离子浓度增加来发挥作用。β-catenin作为Wnt信号通路中的一员，他所处的地位是其他因子无法替代的，他对Wnt通路起着直接的调节开关作用[6]，Wnt信号通路的经典途径被激活后，细胞质内β-catenin含量即增加进而进入细胞核内，在核内β-catenin与TCF因子结合进而促进周期素D等基因的转录，来发挥其促进细胞增殖的作用，这样就可以维持干细胞群稳定[20]，有研究表明过度表达突变体β-catenin会使表皮基底层的干细胞数量增加，这样就会增加体外培养的细胞中干细胞的克隆比例，同时这个作用与TCF/LEF 转录因子的活性也密切相关[21]。这些研究都表明对于表皮干细胞来说要想使其过度增殖，细胞胞浆中的β-catenin含量增加是必须的。C-myc是myc基因家族中的重要一员，他的启动子上面有着TCF4因子的结合位点，而Wnt/β-catenin信号通路中，β-catenin要通过与TCF4的结合来启