不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖及vegfmrna表达的影响-外科学专业论文 word格式.docxVIP

不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖及 VEGFmRNA 表达的影响摘 要目的骨损伤后的临床治疗长久以来一直是广大学者研究的热点。而成骨细胞的增殖 和新生血管的生成对于骨损伤后的骨修复和骨再生过程起到了至关重要的作用。目前认 为，瘦素（Leptin）可参与体内多种代谢诸如骨代谢等多方面的调节。而血管内皮生长因 子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）既可以促进血管新生，同时又具有骨生长因 子的特性。近年来在国内外与癌症相关的一些试验中证明，瘦素可上调VEGF的表达，并呈 剂量依赖性，但在成骨细胞方面的研究尚未见。本实验拟通过观察不同浓度瘦素对离体培 养乳鼠颅骨成骨细胞的作用，探讨瘦素对成骨细胞增殖以及成骨细胞上血管内皮细胞生长 因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达的影响。为骨损伤后的骨修复、再生 的临床治疗提供一定的理论依据。方法取新生 24h 乳鼠颅盖骨，经酶解消化后得到原代成骨细胞，进行体外培养，经 碱性磷酸酶（ALP）和矿化结节染色（茜素红法）后鉴定为成骨细胞。采用 MTT 法（噻唑蓝染色法）测定各组的 OD 值,观察瘦素对成骨细胞增殖能力的影响；采用 RT-PCR 法测 定不同浓度瘦素作用成骨细胞后 VEGFmRNA 的表达情况。结果1.成骨细胞接种 24h 后大量细胞贴壁生长，形态呈梭形，三角形和多角形及不规则形 等多种形态；碱性磷酸酶染色后，大多数细胞膜及胞浆中可见黑褐色颗粒。当细胞约 18-20 天左右形成钙结节后，经茜素红染色，可见散在红色颗粒状物质。2.经 MTT 法检测后表明，瘦素作用 24h 后，各实验组 OD 值随瘦素浓度升高而增加。3.经 RT-PCR 法检测表明 ,VEGF mRNA 可在乳鼠成骨细胞内稳定表达 ; 半定量分析 表明 ,不同瘦素剂量组间 VEGF mRNA 的表达量呈现一定规律 ,随着 瘦素浓度的升高 ,VEGFmRNA 的表达量逐渐增加。结论瘦素可促进成骨细胞增殖；VEGF mRNA 在成骨细胞内稳定表达；瘦素可上调 成骨细胞上 VEGFmRNA 的表达，并存在剂量依赖关系。关键词 瘦素 成骨细胞 成骨细胞增殖 血管内皮生长因子 血管化Different concentrations of leptin acts on osteoblast proliferation and expression of VEGFmRNAAbstractDestination: The clinical treatment of bone injury has long been a research focus of scholars. From The proliferation of osteoblasts and Neovascularization plays a crucial role for bone repair and bone regeneration.Currently the view considered that leptin may participate in a variety of metabolic regulation in vivo,such as Bone metabolism.The VEGF can yet promote either Neovascularization, but also the bone growth.In recent years some experiments associated with cancer at home and abroad show that Leptin can increase the expression of VEGF in a dose-dependent manner,but in terms of osteoblasts has not been seen.To observe the effect of leptin on osteoblasts proliferation and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression. To provide a theoretical basis for the clinical treatment of bone repair and regeneration after injury.Method: Removing the Calvarias of newborn rats aged 24h ,then Primary osteoblasts were cultu