植物蛋白质的提取和含量测定一.pptVIP

植物蛋白质的提取和含量测定 一、实验目的 掌握大豆蛋白的提取及制备大豆蛋白丙酮干粉的方法。 二、实验原理 大豆蛋白主要是酸性蛋白，pI 4.5-5.0，能溶于碱溶液 本实验先利用稀碱提取大豆蛋白，再利用丙酮结合等电点溶解度最低原理沉淀蛋白。 2. Folin-酚法测定蛋白质含量 酚试剂由两部分组成，试剂A为双缩脲试剂，可与肽链发生显色反应，试剂B中的磷钼酸和磷钨酸在OH-条件下不稳定，易被酚类化合物还原显蓝色，因蛋白质中含Tyr被还原成蓝色，颜色深浅与浓度成正比，可用比色法测定。 三、实验器材 分光光度计（500nm），比色皿 计算纸（9 cm×9 cm） 离心机 （离心管100ml 、50ml） 组织捣碎机 精密pH试纸pH 0.5-5.0; pH 4.5-7.0 四、实验试剂 1.大豆干粉 2. 0.2%NaOH 3. 丙酮 （预冷） 4. 6M HCl，1M HCl 5 标准 BSA（0.5 mg/ml） 6. Folin—酚试剂甲（用前组分一: 组分二 = 50:1） （1） 1克 Na2CO3和0.2克 NaOH溶解于50毫升蒸馏水中。 （2） 0.5克硫酸铜（CuSO4?5H2O）溶解100毫升 1%酒石酸钾钠 （KNaC4H4O6?4H2O）中。 每次使用前，将50ml（1）与1ml（2）混合，即为试剂甲。 四、实验试剂