紫杉醇提取工艺的研究进展 --毕业论文.doc

【标题】紫杉醇提取工艺的研究进展 【作者】林 涛 【关键词】?紫杉醇??分离??纯化??提取??研究进展 【指导老师】梁 姗 【专业】生物科学 【正文】1引言紫杉醇（paclitaxel，商品名Taxol）是从红豆杉科红豆杉属（Taxus spp.）植物中分离出的具有紫杉醇烷独特骨架的二萜类化合物，外观为白色结晶粉末、不溶于水，易溶于氯仿、丙酮等有机溶剂，是一种具有独特抗癌机制的天然产物。分子式：C47H51NO14，分子量：853.90，化学名：5β, 20-环氧-1, 2α, 4, 7β, 10β, 13α-六羟基紫杉醇烷-11-烯-9-酮-4, 10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-[（2R. 3S）-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯][1]，其结构式如图1-1所示：?????????????????????????????????????????图1-1?紫杉醇化学结构?紫杉醇具有独特的抗癌作用机制，能诱导与促进微管蛋白聚合、微管装备以及微管稳定，从而阻止肿瘤细胞的生长。正常情况下，微管与微管蛋白二聚体之间存在动态平衡，紫杉醇可以使两者之间失去动态平衡，导致细胞在有丝分裂时不能形成纺锥体和纺锥丝，抑制了细胞的分裂和增殖，从而发挥抗肿瘤作用。体外实验研究表明，紫杉醇依赖性、可逆性地结合到微管上，尤其是结合到N端微管蛋白的β-亚蛋白上，这一作用降低聚合所需的微管蛋白浓度，是动态平衡向着微管装备的方向移动，增加聚合的速率与产量。紫杉醇诱导形成的微管较短，并且比不用紫杉醇时正常形成的微管屈回性约大10倍。另外，紫杉醇抑制有丝分裂所必需的微管网的正常状态再生，会防止正常的有丝分裂纺锥体的形成，导致染色体断裂并抑制细胞复制与转移，紫杉醇改变了细胞有丝分裂过程，使有丝分裂持续时间从0.5h增加到15h，并抑制细胞质分裂。这导致形成多核细胞，这些多核细胞继续回复到G1期，然后试图再次进行有丝分裂，但在有丝分裂中没有阻止细胞(Arresting cells)，在许多细胞中还观察到微核。抑制纺锥体的形成似乎与这种不正常的有丝分裂有关[2]。紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。其药用效果非常显著，从总体上看，在没有一种植物抗癌新药能取代其位置之前，紫杉醇在世界各国均为医院首选的抗肿瘤药物。由于它特异的临床疗效，1992年被美国FAD批准为治疗晚期乳腺癌的特效药而上市。但是，在实际药物生产中，紫杉醇的大规模制备仍存在许多的问题。首先，紫杉醇来源匮乏，其主要存在于珍稀植物红豆杉树皮中，紫杉醇在植物体中含量很低，平均为0.0015%?[3]。其次，存在大量紫杉醇类似物，这些类似物在植物化学结构和极性等方面又极为相似，要将它们完全分离困难很大。目前国际市场上的紫杉醇仍依靠从红豆杉树皮提取及半合成,迄今为止尚未见有第三种形式形成大规模工业化生产的报道。?图1-2? 08年1-10月紫杉醇价格变化紫杉醇的工业生产受到了原料和技术两方面的制约，短期内难以突破[4]。目前从红豆杉中分离紫杉醇及半合成前体的过程一般是用甲醇或乙醇浸出(或超临界提取)，然后经己烷脱脂，二氯甲烷或氯仿萃取得粗提物，经多次硅胶柱色谱后再用制备型高效液相色谱(HPLC)、高速逆流色谱(HCSSS)纯化后重结晶得到产品[5,6]。由于紫杉醇的资源短缺，加之分离时存在得率低，成本高，生产周期长等问题，导致紫杉醇价格昂贵（见图1-2）。为解决这些问题，国内外学者围绕增加得率，提高纯度，简化步骤等对紫杉醇的提取和纯化技术开展了一系列研究。因此，对紫杉醇的提取纯化技术进行深入细致的研究，建立高效、快捷、经济、实用的提取纯化方法就显得尤为迫切。本课题主要探讨紫杉醇的提取和纯化工艺，从紫杉醇基本提取工艺入手，探讨国内外最新的生产、提取、纯化工艺，并对紫杉醇提取工艺存在的问题作出了探讨及对未来发展方向进行展望，以期为紫杉醇的生产提供一些有用的信息。2?紫杉醇提取工艺流程目前，工业生产中制备紫杉醇还局限于植物提取法。因此研制出一套操作简单、提纯高、提取率高的紫杉醇规模制备技术无疑对改善紫杉醇原料药产业现状发挥积极作用。一般来说，从红豆杉中提取紫杉醇的分离工艺可以分为粗提和纯化两个阶段，随着科学技术的不断发展，紫杉醇分离工艺有了很大改进，紫杉醇的纯度和回收率都有较大的提高，分离时间也进一步缩短。其分离纯化过程可用图2-1表示：?图2-1?紫杉醇的提取纯化流程目前用于浸提紫杉醇的最普通溶剂是甲醇和水，Xu和Liu?[10]采用的是甲醇-二氯甲烷(95: 5)混合物，浸提时间为35-60min，而Hoke[11]和Powell?[12]都选择的是纯甲醇，浸提时间则为16-48h。在大多数情况下还