大黄素影响lps诱导的内皮细胞炎症反应的分子机制研究-生物化学与分子生物学专业论文 word格式.docxVIP

摘要摘要大黄素具有一定的抗血管炎症反应的活性，但是其具体的分子机制并不清楚。 本文以体外脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎性 反应为研究模型，探讨大黄素影响血管内皮细胞炎性反应的分子机制，寻找大黄 的作用靶点。在用大黄素与血管内皮细胞共同孵育后，大黄素能够明显地通过抑 制 LPS 诱导的内皮细胞中 NF-?B 的活化和 I?B 的降解，来抑制内皮细胞中促炎因 子 IL-1?和 IL-6，趋化因子 IL-8 和 MCP-1 的表达。但是对于 IL-1?诱导的血管内细 胞中 NF-?B 的活化和 I?B 的降解，大黄素却没有产生抑制作用。这就提示我们， 大黄素的作用靶点不可能存在于 LPS 和 IL-1?所共同诱导的那一段信号转导途径 中，而是应该存在于 LPS 受体复合物部位，影响 TLR-4 的表达或 LPS 受体复合物 的形成。进一步研究发现胆固醇结合试剂（methyl-?-cyclodextrin，MBCD）能够 抑制传代的不能够表达 mCD14（membrane CD14）的血管内皮细胞中 LPS 诱导的 NF-?B 活化，这表明脂筏参与调解了传代血管内皮细胞中 LPS 通过 TLR-4 诱导的 NF-?B 活化。大黄素可以通过使内皮细胞脂筏中的胆固醇泄漏来破坏脂筏的结构， 从而抑制 LPS 诱导的内皮细胞中 NF-?B 的活化和细胞因子的表达。大黄素这种抑 制 LPS 诱导的血管内皮细胞炎性反应的活性，表明它可能会在治疗动脉粥样硬化 或与炎症相关的心血管疾病方面具有一定的价值。关键词：大黄素，LPS，TLR-4，抗炎，NF-?B，人脐静脉血管内皮细胞ABSTRACTEmodin [1, 3, 8-Trihydroxy-6-methylanthraquinone] has been reported to exhibit vascular anti-inflammatory properties. However, the relevant anti-inflammatory mechanisms are not well understood. The present study was design to explore the molecular target(s) of emodin in modifying lipopolysaccharide (LPS)-associated signal transduction pathway in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Cultured HUVECs were preincubated with 1 to 50?g/ml emodin for 30 min, LPS-induced proinflammatory cytokines (IL-1, IL-6) and chemokines (IL-8, MCP-1) expression were inhibited dose-dependently, which agreed well with the NF-?B activation and I?B degradation detected by immunocytochemistry and western blotting, respectively. However, emodin didn’t inhibit the IL-1?-induced NF-?B activation and I?B degradation in HUVECs, suggesting that emodin maybe affect the expression of toll-like receptor-4 (TLR-4) or the formation of LPS-receptor complex in the lipid rafts. Further investigation showed that cholesterol binding agent methyl-?-cyclodextrin (MBCD) inhibited LPS induced NF-?B activation in passaged HUVECs (CD14 negative). These results indicate that lipid rafts play a key role in LPS signaling pathway in passaged HUVECs. Moreover, our studies also found that emodin dis