实验3-线粒体和液泡系的.pptVIP

实验三 线粒体和液泡系的 超活染色与观察 一 、 实验目的 1、了解细胞和细胞器的超活染色技术。 2、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的 形态、数量和分布,了解植物细胞液泡系的发育过程。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。 体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 线粒体 是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。 液泡 是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着色。 三、实验用品 （一）器材 显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。 （二）试剂 1、Ringer 溶液 生理盐水、缓冲液 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml 2、1/3000中性红Ringer溶液 棕色瓶备用。 3．1/5000詹姆斯绿B Ringer溶液 最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 （三）材料 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 小麦幼根根尖 四 实验方法 (一) 线粒体的超活染色与观察 詹纳斯绿B能专一对线粒体进行超活染色，呈蓝绿色。 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体 的超活染色观察 载玻片→ 37℃水浴锅的金属板→滴两滴詹纳斯绿B染液 牙签→从口腔粘膜刮取上皮细胞→放入载玻片染液→染色10-15分钟（注意不可使染液干燥, 必要时可再加滴染液） →盖上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液→观察 2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的 超活染色 载玻片→撕取一小片洋葱鳞茎内表皮滴→一滴詹纳斯绿B染液→染色10-15分钟 吸去染液→加一滴Ringer液，注意使洋葱内表皮展平→盖上盖玻片→观察 （二） 液泡系的超活染色与观察 中性红对液泡系的染色具有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色。 小麦液泡系的超活染色与观察 小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→镊子轻轻下压盖玻片→观察 五．实验结果 在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。 六．实验中的注意事项 1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充 分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。 七、作业 1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的图像. 2 ．总结实验成功或失败的原因. * * 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 五、实验结果 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即线粒体。 线粒体 2009年摄于新大生科院数码互动显微镜室 口腔颊部上皮细胞示线粒体 五、实验结果 在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至旁边，在其周围有线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或