DNA的结构(下)教学教案.ppt

“Heavy” DNA;3、DNA半保留复制的生物学意义：;（二）与DNA复制有关的物质; 5、 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶 以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物 反应需要有模板的指导 反应需要有3?-OH存在 DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ?;性质 ; α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3’-5’ 外切 - - + + + 酶活性 功能; 6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用 ;7、DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。 例：大肠杆菌中的DNA旋转酶;8、DNA 解螺旋酶 /解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。 E.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。;9、单链结合蛋白(SSBP-single-strand binding protein)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 ;（三）DNA的复制过程（大肠杆菌为例）;1、双链的解开;从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子 复制时，解链酶等先将DNA的一段双链解开，形成复制点，这个复制点的形状象一个叉子，故称为复制叉;复制方向和速度：;Electron Microscopy of replicating DNA reveals replicating bubbles. How does one prove bidirectional fork movement?;Pulse with radiolabeled nucleotide; chase with cold nucleotide. Then do autoradiography;双链解开、复制起始;大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合;在HU蛋白和ATP的共同作用下,DNA复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链;解链酶六体分别与单链DNA相结合(需DnaC帮助),进一步解开DNA双链;2、RNA引物的合成;DNA的半不连续复制; 在DNA复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的???成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段。;4、切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 （复制终止）; 5、复制终止; b、专一性终止蛋白 E.coli 中由 tus gene 编码 通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用;;双链环状、θ型复制、双向等速;（四）DNA复制的其它方式; 线性DNA的末端复制的问题;(1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子。如λ噬菌体：滚环产生多聚复制子）； (2）某种蛋白质可能会介入，在真正的末端上启动。几种线性病毒核酸具有与5`端碱基共价结合的蛋白质，其中了解最清楚的例子是腺病毒 DNA )。 (3）DNA可形成特殊的结构，如在末端形成发夹。使分子没有游离末端。草履虫（Paramecium）的线性线粒体DNA的复制中就形成了一种交联； (4）末端是可变的，而不是精确确定的。真核生物染色体可能采用这种方式，在这种情况下，DNA末端的短重复序列的拷贝数改变（如端粒的复制）;; 线性DNA 双链的复制 单一起点、单向，如：腺病毒; 腺病毒（Adnovirus-2） DNA的复制 ; 腺病毒 DNA 复制起始;;; 不需RNA引物，在正链3’－OH上延伸; 只有一个复制叉;D环复制;（五）真核生物中DNA的复制特点;真核生物复制起始区 酵母的复制起点称为:自主复制顺序(autonomously replicating sequence,ARS) ARS序列的共同特征：具有一个称为A区的11个A-T碱基对的保守序列。 起始需要起始点识别复合物ORC参与，ORC结合于ARS，它是由6种蛋白质组成的复合物。; 真核生物染色体 DNA末端补齐模式 ;（2） 端粒酶（ Telome