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三．体外受精与培养 1．卵母细胞体外培养4—6h 2．精子处理：上游法，percoll法, Isolate法 3．培养皿上微滴受精（2—3个卵子加5000条活精子） 4．受精卵培养与观察 发育阶段 距受精时间（h） 受精卵 16—20 两细胞 24—26 四细胞 44—48 六—八细胞 64—72 桑椹胚 95—100 囊胚 105—120 破壳 125—135 四．胚胎移植与黄体支持 ? 胚胎移植 1．6—8细胞期移植 2．囊胚移植 ? 黄体支持 1．? D0，D3，D6 HCG 2000iu im 2．? 黄体酮 20mg im q.d 黄体酮栓 100mg q.d 3． HCG+黄体酮 五．超排卵的异常反应 1．OHSS：卵巢过度刺激综合征 (0.4%—5%) 由于血管通透性增高，循环系统液体外移， 引起体腔积液，造成恶心，腹胀痛，尿少， 氮质血症，血栓形成。 轻度 恶心，稍腹胀，卵巢5cm 中度 恶心，腹胀，腹水1.5L，卵巢10cm 重度 腹胀痛，胸腹水，少尿等，卵巢＞12cm OHSS治疗 轻中度门诊观察，停用HCG支持。 重度住院： 1.测BP，腹围，24h出入量，血电解质， 肝肾功能。 2.补充胶体，血蛋白，必要时利尿， 可以 给消炎痛，抗凝药物，强的松龙。 3. 停用HCG。 4. 必要时穿剌卵泡。 5. 无法纠正者要人工流产。 2． 卵巢反应不良：Gn＞3支/d HCG日卵泡≥14mm的＜3个 3． 多胎妊娠 4． 早孕时使用GnRH-a 5． 卵巢肿瘤与乳腺肿瘤发生 六．配子及胚胎冷冻保存 1．胚胎冷冻 程序降温——慢速冷冻 快速冷冻 快速复温 受精后2天可保存 2．卵子冷冻 目前仍待解决技术问题 3．囊胚冷冻 4．精子冷冻 七．选择性减胎术 ? 妊娠8—10周进行，经腹或阴道 1．15%KCL胎心内注射 2. 胎心刺杀术 八．赠卵，赠胚与代母技术 ? 供体 受体 ↓ GnRH-a降调 超排卵　　↓ ↓ HRT 取卵 补佳乐2—8mg/d 黄体酮50—100mg/d 取卵日起 ↓　　　　↓ 体外受精 ↓ 胚胎 子宫内胚胎种植 　　　　　　　↓ 妊娠10—12W停用HRT ICSI（卵浆内单精子注射） 1992年比利时成功第一例，1996年中国成功 适应于：严重少精症：一次射精＜200万/ml 少弱畸精症：一次射精＜200万/ml, 2级活力＜25%， 畸形精子＞85% IVF—ET失败者 输卵管阻塞或先天缺如 ? 隐患：可能将遗传缺陷至子代 PGD（种植前诊断） 90年代中后期研究较多，对比4—8cells胚胎行透明带钻孔， 吸取1—2个卵裂球进行分子生物学研究。 ? PCR法： 检测X—性连锁遗传病，单基因遗传病 FISH法： 检测非整倍体等染色体数目与结构异常 辅助孵出（AH） 机械法，化学法，激光法 IVF—ET技术新挑战 1．培养系统的改进 a.共培养：与体细胞（如输卵管上皮）共培养 b.???序贯培养 c.???卵母细胞体外培养 2．辅助孵出（AH）： 机械法，化学法，激光法 3．卵子冷冻 4．卵浆补充： 可提高40岁以上的妇女IVF—ET的成功率 5. 核移植 克隆助孕技术 clone：生物体通过无性繁殖形成的基因型完全相同的子代。 第一代 胚胎细胞核转移 第二代 体细胞核转移 供核胚胎细胞 供质 供核体细胞 卵母细胞 ? 　　 　 移核卵　　　　　　　　 　　 　 ↓ 重构