结核诊断骨科科会 课件.pptVIP

结核RNA在细胞中拷贝数很多 使用rRNA为靶标，大大提高了取样效率和检测灵敏度。 一个或几个拷贝DNA 104核糖体RNA (rRNA) 16S rRNA 23S rRNA DNA扩增技术（PCR）用于病原体检验的不足 “死菌检测也阳性”，与临床相关性差 基因与表型不吻合 (耐药检测) 不能区分“潜伏感染”“活动性感性” 交叉污染问题（三个房间） 变温检测，对仪器要求高 反应抑制问题（Taq酶） RNA扩增技术检验的优势 灵敏度高：RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数（104 ≥1~6 ） 与临床相关性好，可以区分“死菌”“活菌”：病原体死亡，RNA很快降解（=“培养”） 减少无效治疗，比如抗生素滥用 可以诊断“活动性感染” 活动性感染：指示RNA转录活跃 潜伏感染：指示RNA不转录 不易污染：靶标和扩增产物都是RNA RNA 用于TB的检测多国诊疗指南 2009：美国CDC更新NAAT法在TB实验室诊断中应用的指南 ——所有疑似TB的初诊病人，除了做涂片之外，都必须用TB-SAT检测至少一份样本。 （RNA获得FDA 认证可检测涂阴、涂阳标本，DNA只获得FDA 认证可检测涂阳标本） Updated Guidelines for the Use of Nucleic Acid Ampflication Test in the Diagnosis of Tuberculosis (2009) United States 目前，我实验室前期预实验275例，灵敏度达到93%，特异性达到85%.该方法只适合痰标本 Company Logo 结核实验室 快速诊断技术应用进展 结核实验室 夏强 一、简要介绍 二、新技术应用 结核病实验室 免疫组 结核组 分子组 培养 药敏 镜检 结核病实验室工作分工 麻烦 生物安全培训 结核检测技术应用 液体培养及药敏（金标准） MGIT960培养及药敏 BACTEC MGIT 960 全自动分枝杆菌检测系统 国内对骨关节结核培养阳性率报道不一：14.5%、46.4%、30.1%、42%、83.87%不等 骨关节结核患者一般术前都经过抗结核药物治疗，A 群为生长旺盛菌群，但易被药物杀灭，而 B、C、D 群多为休眠或静止状态，代谢缓慢。骨关节结核标本的培养在参照肺结核痰培养的基础上，应该适当延长培养时间，建议延长到 8 周左右 死骨、肉芽、坏死椎间盘、干酪样坏死等病变组织的培养阳性率（45.45%）略低于脓液及脓血标本组（63.83%）。 脊柱结核患者的培养阳性率（61.40%）略高于髋关节、膝关节、踝关节、肘关节、腕关节、骶髂关节等其他部位结核组（41.67%）。 第四次全国结核病流行病学抽样调查结果表明，非结核分枝杆菌（NTM）在分枝杆菌分离株中占 11.1%，牛分枝杆菌占全部分枝杆菌株的 2.5%。NTM 感染无论从临床表现、影像学表现，甚至病理学表现，都与结核杆菌感染极为相似，很难鉴别， 结果统计 检测方法 平均测定时间（天） 范围（天） P值 L-J固体培养 27.5 10-50 ＜0.05 MGIT960培养 11.48 　 1-28 结果统计 时间 例数 现象：同一耐药患者在治疗的不同阶段，药敏试验结果发生了改变？ 1、检测方法本身的可靠性：药物的稳定性，浓度，菌株的生长状况。 2、耐药发生了演变：原发耐药和继发耐药 3、混合感染问题：感染了多种分枝杆菌 人体对于结核分枝杆菌感染的免疫反应主要是细胞免疫。 T淋巴细胞和巨噬细胞的作用关系到感染的进程和演变。 巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后，就会把它们消化成大小不一的片断。特异片断(抗原肽)与巨噬细胞和其他抗原递呈细胞的主要组织相容性复合体相结合，表达于巨噬细胞表面，并递呈给T细胞。 特异性CD4 T细胞能产生特征性淋巴因子，包括一种能够刺激T细胞增殖的IL-2和γ-干扰素。 IGRA就是检测被结核菌激活的记忆T细胞释放出γ-干扰素水平。 2.2 TB-IGRA APC T cell IFNg IGRA应用 2.3 HAIN技术得到全面认可 HAIN技术 效果评价 中国疾控中心结核国家参比实验室实验数据 分枝杆菌的分类： 一、缓慢生长菌群 1．结核菌群：包括人型结核杆菌，牛型结核杆菌，非洲分枝杆菌，田鼠分 枝杆菌。 2．I 群光产色菌。如：堪萨斯、海分枝杆菌等。 3．Ⅱ群暗产色菌。如：瘰疠、戈氏分枝杆菌。 4．Ⅲ群不产色菌。如鸟型、胞内、溃疡分枝杆菌等。 二、 迅速生长菌 即Ⅳ群菌，包括偶发、