药品微生物限度与无菌检查方法验证实验的要点及体会汇.pptVIP

药品微生物限度与无菌检查方法验证实验的要点及体会 中国药品生物制品检定所 马仕洪 北京 2007年1月 一、方法验证实验的背景及程序 1、关于方法验证（背景） 2、方法验证实验的一般原则和程序 1、关于方法验证（背景） 《中国药典》2005版 国食监注〔2005〕234号“关于颁布和执行《中国药典》2005年版有关事宜的通知” 国药典发〔2005〕98号“关于执行《中国药典》2005年版微生物限度检查法和无菌检查法有关问题的说明” 中检药〔2006〕862号“第七届全国药品检验所抗生素室主任工作会议暨全国药品微生物检验方法及标准研讨会会议纪要” 为什么验证? 1）、采用经过验证的方法，是分析测量科学的基本要求，是各种法规遵循工作的基础。药品微生物检查作为整个药品质量体系中的一个环节，应与其他检验项目一样，对方法和条件进行考察，以保证结果的科学性，如鉴别、含量测定。 2）、验证的思想其实早已贯彻于微生物检测的诸多方面：无菌环境验证（尘埃离子、浮游菌、沉降菌检测）、灭菌器的验证、培养基灵敏度检测、阴性对照、阳性对照等等。 为什么验证? 3）、2005版充分借鉴发达国家经验，将微生物检查方法的验证实验进行了更加系统化的规定和要求。验证实际上伴随着整个实验过程，实验过程中的每一个环节均应有合理的证明（验证），保证其对结果判断没有影响。 4）、有了系统的方法验证，可以避免以往因为阳性菌选择不合理、方法不合理而造成的漏检、误判，以保证结果的科学可靠，这一点无论对于当前无菌检查的一次性报告，还是对于实验室认证认可、以及新的药品注册管理办法的要求都是相一致的。 为什么验证？ 5）、验证的必要性（质量控制的新手段）： 表6 同厂不同批黄连上清丸稀释法的回收率比较实验结果（1：200）Tab 2 recoverice of dilute method in microbiological test of huanglianshangqingwan from different batchs in same corporation (1:200) 2、方法验证实验的一般原则和程序 验证什么？ 怎么验证？ 验证什么？ 微生物检验： 某种样品采用某种方法得到一个检查结果。 验证什么？ 验证什么？——需要验证的重点环节 验证实际上伴随着整个实验过程，实验过程中的每一个环节均应有合理的证明（验证），保证其对结果判断没有影响。 前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应在验证范围内。已有标准规程（SOP）和充足实验证明的前处理方法可以直接采用，但出现疑问应进一步研究提高。 供试品中抗菌活性的去除是当前验证工作的重点。尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。 方法疑问实例——菌在何处？ 怎么验证？ 利用供试品与微生物的差异，降低或消除供试品的影响，通过模拟实验对降低或消除效果加以检验。 供试品中抗菌活性的去除 稀释法——降低供试品的相对浓度 薄膜法——利用体积差异分离 中和法——利用化学（生物）专属性灭活 离心法——利用沉降系数差异分离 抗菌活性去除效果的检验 应根据供试品的特点，选择敏感菌株，对供试品抗菌活性去除效果加以检验（阳性菌的回收实验），再按药典要求全面验证，提高效率。 选择敏感菌株 间接方法——文献、技术资料（可靠） 直接方法——预实验（体外抑菌实验） 参考选择： 一般中药选择枯草和金葡； 一般抗生素根据抗菌谱选择。 表8 选择敏感菌株 二、方法验证实验的几个要点 1、无菌检查法验证实验要点 2、微生物限度检查法验证实验要点 3、验证实验实例 1、无菌检查法验证实验要点 样品 菌种和实验用菌液 标准化操作 实验器材 无菌检查样品 无菌检查样品 主要是取样量的问题 《中国药典》2005年版对无菌检查的“检验数量”和“检验量”作了明确的解释和规定。 表2中上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量 * 每种培养基各接种10支供试品 表3中上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量 表3注释 *1 ：每种培养基各接种10支供试品。 *2 ：抗生素粉针剂(≥5g)及抗生素原料药(≥5g)的最少检验数量为6瓶(或支)，桶装固体原料的检验数量为4个包装。 *3 ：如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。 无菌检查样品 三点体会： 一是附录规定检验量的表格中不包括阳性对照用样品量，虽然附录另处有专门说明，仍然容易忽略； 无菌检查样品 三点体会： 二是无菌检查时应强调“检验数量”，主要是保证实验结果的代表性，而阳性对照实验和验证实验仅须满足“检验量”总量要求即可，以检验样品对实验结果的影响，即保证实验结果的可靠性，验证实验可以由