园艺专业毕业论文 苹果叶片转基因体系探索汇编.docVIP

目 录 摘要 Abstract 引言 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1主要的生化试剂 1.1.2供试农杆菌菌株和质粒2 根癌农杆菌介导的苹果遗传转化 1.2. 1 苹果外植体材料的准备 1.2. 2 农杆菌侵染液的制备 1.2. 3 侵染 1.2. 4 转化子的筛选再生 2 结果和分析 2．1 M7无菌苗的扩繁 2．2 M7砧木的叶片再生 2.3 农杆菌划线接种与单克隆繁殖 2.4 叶片的转化再生 3讨论 3.1 M7再生的影响因素 3.2共培养条件对转基因的影响 致谢 参考文献 苹果叶片转基因体系探索 园艺专业 胡翔宇 指导老师 段艳欣 摘要：近年来，苹果遗传转化研究取得了较大的进展，已有多种标记基因和目的基因成功转入苹果中并且得到稳定表达和遗传。农杆菌介导法是苹果上应用的主要转化方法，叶片再生不定芽途径是被广泛应用的受体系统。影响农杆菌介导成功与否的因素很多，文章从转化方法、叶片再生能力、菌株类型以及农杆菌侵染条件等方面综述了目前有关研究成果，指出目前依然存在转化效率不高、外源基因表达强度不够、对转化植株的选择不够重视等诸多问题。 关键词：苹果；遗传转化；农杆菌介导；叶片再生 Apples leaves gm system Student majoring in Horticulture Hu Xiangyu Tutor Duan Yanxin Abstract: in recent years, apple genetic research has made great progress, various marker genes and gene into apple and successful expression and genetic stability. Agrobacterium-mediated technique was applied into the main apple, leaf regeneration in vitro shoot is widely applied receptor system. Affect the success of agrobacterium mediated many factors, this article from the transformation method, leaf regeneration, strains of bacteria infection type and reviewed the current conditions of relevant research results are pointed out, still exists transformation efficiency is not high, the exogenous gene expression of strength, selection of plant many problems, such as insufficient attention. Keywords: apple, Genetic transformation, Agrobacterium mediated, Leaf regeneration 引言 随着转基因技术的发展，用于苹果遗传转化研究的受体基因型越来越多，除了绿袖，主要还有红元帅（RedDelicious）[4]、新乔纳金[5]、嘎拉（Gala）、金（GoldenDelicious）、Elstar [6]、Braeburn[7]、Merlijin [8]、乔纳金（Jonagold）、富士（Fuji）王林（Orion）[9]、金矮生（Jonagored）[10]、皇家嘎拉（Royal Gala）、辽伏（Liaofu）[11]、元帅（Delicious）、粉红佳人（Pinklady）、M7和八楞海棠[12]等。 苹果愈伤组织再生植株尚存在较大困难，叶片再生胚状体还不够成熟且周期较长。而大部分品种类型的叶片再生不定芽体系已经比较成熟， 且再生周期短，因而成为苹果转基因的主要受体系统。叶片高效再生不定芽是实现基因转化的前提，是获得转基因植株的关键。影响叶片高效再生因素包括试材的基因型[17]，基本培养基类型，培养基中植物生长调节物质的种类及配比，光照条件和接种前叶片的生理生化状态（包括苗龄[18]、叶片成熟度、叶片不同部位以及外植体的来源等），其中试材基因型是最重要的因子。 由于不同的菌株生长势不同，所以菌液浓度和侵染时间不同。农杆菌菌液浓度太低，侵菌时间太短，叶片不能附着足够的菌液，转化率低；而过度的侵染不仅需要高浓度的抗生素来杀菌，材料所受的伤害也会太重，不利于转化材料的恢复，甚至导致材料软腐死亡。应掌握的原则是