11第10章：吸光光度法.ppt

第10章 吸光光度法 化学分析：常量组分(1%), Er 0.1%～0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 10.1概述 10.1.1 吸光光度法的特点 光学光谱区 2.吸收光谱产生的原理 物质分子内部三种运动形式： （1）电子相对于原子核的运动 （2）原子核在其平衡位置附近的相对振动 （3）分子本身绕其重心的转动 分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级 三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量 分子的内能：电子能量Ee 、振动能量Ev 、转动能量Er 即 E＝Ee+Ev+Er ΔΕeΔΕvΔΕr 能级跃迁 紫外-可见光谱属于电子跃迁光谱。 电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。 （4）吸收光谱的波长分布是由产生谱带的跃迁能级间的能量差所决定，反映了分子内部能级分布状况，是物质定性的依据。 （5）吸收谱带强度与分子偶极矩变化、跃迁几率有关，也提供分子结构的信息。通常将在最大吸收波长处测得的摩尔吸光系数εmax也作为定性的依据。不同物质的λmax有时可能相同，但εmax不一定相同； （6）吸收谱带强度与该物质分子吸收的光子数成正比，定量分析的依据。 物质对光的选择性吸收及吸收曲线 吸光度与光程的关系 A = ?bc 吸光度与浓度的关系 A = ?bc 偏离朗伯-比尔定律的原因 非单色光引起的偏离 2. 介质不均匀引起的偏离 3. 由于溶液本身的化学反应引起的偏离 解离、络合反应、其他反应 4. 显色反应的干扰 朗伯-比尔定律的适用条件 单色光 应选用?max处或肩峰处测定 2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等) 3. 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强 吸光度的加和性与吸光度的测量 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 光电管 光电倍增管 多通道仪器（Multichannel Instruments） 光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管) photodiode arrays (PDAs) 同时测量200～820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加 316 1/2 倍. 有机显色剂 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定） 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。 光电比色法 10.6 吸光光度分析法的应用 1. 单一组分测定 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6) 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。 2. 多组分的测定 3. 光度滴定 典型的光度滴定曲线 4. 络合物组成的测定 1:1 表观形成常数的测定 (设M、R均无吸收) M:R=1:1 5.一元弱酸离解常数的测定 MO吸收曲线 MO离解常数的测定作图法 6. 双波长分光光度法消除干扰(不要求) 双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 7. 导数分光光度法(不要求) 常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定 1.氢氯噻嗪. 2.硫酸双肼肽嗪 3. 盐酸可乐定 4.常药降压片 肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取 方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6％的HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40℃挥干，剩余物用0.1mol·L-1NaOH4mL溶解后，紫外导数光谱测定。 1、了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 定性分析的基础—吸收曲线。 定量分析的基础—朗伯-比尔定律：A=?bc=-lgT 2、灵敏度的表示：摩尔吸光系数，桑德尔灵敏度 3、偏离朗伯-比尔定律的原因 4、朗伯-比尔定律的适用条件 5、紫外可见分光光度计的基本部件 6、显色反应的选择 7、影响显色反应的因素 8、消除显色反应干扰采取的方法 9、测定条件的选择：适宜的测量范围 10、应用: 单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。 通过滤光片得一窄范围的光(几十nm