环境分子生物学技术在饮用水研究中应用 .pptVIP

* * 1细菌群落多样性沿程增加，而滤池顶部（0.2 m）的微生物群落与其他部位（0.4 m、 1.0 m、 1.2 m）差别十分显著； ?2Alphaproteobacteri (Alpha-变形菌门)是生物滤池的主要细菌群落，而前人研究发现Betaproteobacteria 是生物滤池的主要细菌群落； 3 亚硝酸盐氧化细菌Nitrospira在滤池顶部（0.2 m）处是最重要的优势菌，而0.4 m处含量已很少，证实了硝化作用主要发生在活性炭顶部，但没有发现最常见的Ntrobacter。 4 在生物滤池中首次发现了2种潜在致病菌，虽然Chromobacterium（色素细菌）含量较低，但它与许多人类严重疾病（包括罕见性疾病）有关，目前已有很多它与人类死亡有关的报道。鞘氨醇单胞菌属与很多感染病有关系，也有很多接触受污染水发病的报告，而它在活性炭层底部和砂层中含量很高（约10%），因此也值得关注。 * B 氨氧化细菌（AOB）和古细菌（AOA） * * 氨氧化细菌（ammonia oxidizing bacteria，AOB）主要有Nitrosomonas、Nitrosococus 、Nitrosospira、Nitrosolobus和Nitrosovibrio等种类。 Konneke et al.(2005)分离出了一株具有氨氮氧化能力的古细菌（ammonia oxidizing archaea ，AOA) ，目前在很多生态系统中都发现AOA，如海水和沉积物、废水处理工艺、饮用水管网、处理地下水的生物滤池等。 amoA gene of AOA: Arch-amoAF (5’-STAATGGTCTGGCTTAGACG-3’) and Arch-amoAR (5’-GCGGCCATCCATCTGTATGT-3’) AOB community amoA gene of AOB: amoA-1F (5’-GGGGTTTCTACTGGTGGT-3’) and amoA-2R (5’-CCCCTCKGSAAAGCCTTCTTC-3’) * * * * 1 AOB群落具有沿程变化的特征，而AOA没有监测出； 2Nitrosomonas 是优势菌，可能对氨氮去除发挥着重要的作用。 * * 上向流BAC吸附池具有较高的活性炭床吸附能力和生物能力； 不需设水反冲洗设施，仅保留了气冲设施，据工艺布局，气冲设施又与砂滤池合用，可在一个系统中调用和控制； 由于活性炭床层的膨胀，炭颗粒间较为松散，阻力较小，相应的水头损失也较小，并且气水同向运行，炭床内部不会有气泡滞留形成气阻； 可减少二级提升，便于整个工艺流程前后衔接，管理、维护、控制都比较方便，节省了占地和投资及运行费用等优点。 * * * * * * 谢曙光 北京大学 环境科学与工程学院 * 特点 数量多 分布广 繁殖快 种类多 适应能力强 作用 污水净化 饮用水净化 地表水修复 土壤和地下水修复 物质循环 固体废物处理 * 1生物量 细菌计数法 脂磷法 2 电镜法 3 生物活性 脱氢酶法 OUR法 4 微生物群落 核酸指纹法 * * 1 盲目性、偶尔性、操作繁琐 2 能够培养的微生物占0.1-1% 3 偏离实际环境，难以在真实环境发挥作用 * 分子生物学技术类型 普通PCR 荧光定量PCR 微生物群落研究方法 TRFLP 克隆文库 高通量测序技术 * * 1.双链DNA分为两条单链 连接碱基之间的氢键较弱，它们在高温下断裂 脱氧核糖和磷酸之间的共价键结合力较强，在高温下保持不变。 2.引物与靶序列结合 目的并不是复制整个DNA链，而是复制某一段特异的几百个碱基对的靶序列 引物是短的、人工合成的单链DNA序列，它们对于待扩增的靶区域是特异的 需有两条引物，每一条都与变性过程中产生的DNA单链互补的引物。目标DNA的起始序列与标记引物结合。 退火温度：退火通常在40-65℃进行，视引物的长度和碱基序列而定。这样保证了引物与靶序列退火结合的高度特异性。 3.延伸- Taq DNA聚合酶被用于复制DNA链 Taq DNA聚合酶在引物标记的地方开始合成过程。它使溶液中自由的互补核苷酸（dNTPs）的掺入和结合，合成与目标DNA区域原始双链一样的新的双链DNA分子。 * TRFLP技术以聚合酶链式反应（PCR）技术为基础，将一条引物以荧光标记，16S rDNA扩增产物用限制性内切酶酶切，形成一系列末端带荧光标记的16S rDNA片段。经毛细管电泳分离进入DNA测序仪，形成图谱和表格，根据测得片段的数量和相对峰面积，确定微生物群落的结构及组成多样性，从而准确分析微生物群落结构的时空演