最新仿刺参Apostichopus japonicus基因组BAC文库的构建研究.pdfVIP

摘要 一．在我国海水养殖产业占掘重要地位。基因组大片段文库是基因组学研究必 不可少的基础工具．基因作图的先决条件。为了阐明仿刺参基因组的结构与功 能，开展基因作图、图位克隆重要功能基因、QTL定位，晟终实现仿刺参全基 因组测序．本研究在系统地摸索并优化了BAC文库构建过程中几个关键技术环 Artificial 节的基础上，成功构建了一个仿刺参细菌人工染色体(Bacterial Chromosome．BAC)文库。 1、仿刺参基因组大小的测定 domesticus)红血细 仿刺参基因组大小测定采用流式细胞术，以鸡(Gallus 胞DNA含量(2 84±0 只刺参的基因组古量．其C-值为(O 02)Pg，由此得出仿刺参基因组大小为 (8215±19 56)Mb。 2、仿刺参BAC文库的构建及质量鉴定 I文库)构成． 本研究构建的仿刺参基因组BAC文库由单种酶切文库(Mbo 目前包括19个384板，总计7，206个克隆。随机挑取30个BAC克隆进行质量 鉴定。结果显示，MboI文库平均插入片段大小约为103kb，覆盖仿刺参基园组 0．9倍。基因组文库覆盖率与基因在文库中出现的几率密切相关，为了确保目的 基因在文库中出现的高概率，扩增库容的工作正在进行中。同时，对5个随机 BAC克隆的稳定性检测表明，插入DNA片段在大肠杆菌宿主中遗传稳定，没 有BAC克隆存在插入片段的丢失和重排现象。 本研究构建了我国第一个海参BAC基因组文库，尽管目前文库的覆盖率和 插入片段大小及均匀程度还不能满足基因筛选、作图和测序等需要，但是一个 完整的适用海参的BAC文库构建技术体系已经建立．为海参的基因组研究提供 了技术支撑。 组大小 Constructionofa BacterialArtificial ofsea Library Abstract Sea isoneofthemost economic cucumber．和ostichopusjaponicusimportam inChinaPreviousstudies focusedontheseresearch aquaculturespecies mainly fieldssuchas and 013 aquacultureecology．physiology,nutrition．ethologyetc，study its is behind bacterialartificial genomicsrelativelydropped Large-insert is toolsfor researchAMbo1 chromosome(BAC)libraryindispensablegenomics hasbeenconstructedbasedon ofseveral library optimizationkeytechnologiesin the construction orderto structure BAClibrary proGessinthisstudyin clarifythe andfunctionof the function