土壤中能够分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

一、研究思路 （一）筛选菌株 （二）统计菌落的数目 （二）统计菌落数目 （二）统计菌落数目 （二）统计菌落数目 复习：显微镜直接计数法 复习：显微镜直接计数法 二、实验设计 二、实验设计 包括两个细菌亚群，一类是亚硝酸细菌（又称氨氧化菌），将氨氧化成亚硝酸，另一类是硝酸细菌（又称硝化细菌），将亚硝酸氧化成硝酸。这两类菌能分别从以上氧化过程中获得生长所需要的能量，但其能量利用率不高，故生长较缓慢 大多数为专性化能自养型，不能在有机培养基上生长只有少数为兼性自养型，也能在某些有机培养基上生长， 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、 质地等等，都是区分细菌的重要手段。 菌 落 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、 质地等等，都是区分细菌的重要手段。 菌 落 哈尔滨工程大学计算机科学与技术学院硕士学位论文答辩 */20 Peter Chen 陈鹏 Aug , 2009 尿素分子的立体结构 设置对照 统计菌 落数目 筛选 菌株 什么是菌株 菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。 实验室中筛选菌株 自然界中筛选菌株 从相应环境中去找 原理 方法 纯且活状态所保存的菌种 培育菌株则要得到菌落 KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后， 用蒸馏水定容到1000mL。 培养基成分 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 此配方能否筛选出产生脲酶 的细菌？为什么？ 该培养基的配方中，为微 生物的生长提供碳源和氮 源的分别是什么物质？ （一）筛选菌株 统计微生物 数量的 常用方法 显微镜 直接计数 活菌 计数法 （活菌和死菌均有） 统计微生物 数量的 常用方法 （活菌和死菌均有） 1 操作方法： 稀释涂布平板 统计菌落数 2 原理： 1个菌落=1个活菌 （一般情况） 平板划线法 稀释涂布平板法 纠错 第二位同学其中1个平板的计数结果与另2个相差远，说明在操作过程中可能出现了错误 第一位同学没 有设置重复组， 因此结果不具有 说服力 4 统计结果： 3 统计原则： ①选30～300个菌落 的平板统计 ②每个稀释度取3个 平板取其平均值 菌落数往往比活 菌的实际数目低 即演即练 见《实验手册》 血球计数板 第1天 第3天 第5天 第7天 （计数活菌和死菌） 实物图 正面图 侧面图 计数池 滴液处 复习：显微镜直接计数法 血球计数板 （计数活菌和死菌） 盖上盖玻片再往滴液处滴液，让其自行渗入计数室 例:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先??????? 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有????????? 个。 2×108 稀释 纠 错 土样不同 A同学 培养基 遭污染 A同学培 养基无选 择作用 改进 A同学的培养基在不加土样的情况下培养 其他同学用 与A同学相 同的土样 A同学的土 样接种到 普通培养 基上培养 （三）设置对照 土壤 取样 制备 培养基 稀释 样品 取样 涂布 培养观察计数 实验过程 （一）土壤取样 二、实验设计 肥沃、中性、潮湿 取地表下3-8cm的土样 小铲信封提前灭菌、土样装入信封后密封 （二）制备 培养基 培养皿 标记种类 日期 调节pH 值及灭菌 以尿素 为唯一 氮源 9个固体 培养基 （三）样品 的稀释 视不同微生物选择不同稀释倍数 每次稀释完，吹洗三次，使之混匀 二、实验设计 取104105106分别涂布 每个稀释度涂布3个平板 平板写上稀释度 二、实验设计 （四）涂布 平板 Note1 培养皿倒置培养 观察菌落特征（形态、大小、隆起程度、颜色等) 二、实验设计 Note2 Note3 Note4 （五）培养观察计数 结果:数目稳定时的记录为准。 计数：30-300间，取该稀释度的平均值 每隔24小时统计一次菌落数目 自主设计记录表 三、鉴定：（筛选后必鉴定） 原理：脲酶催化尿素分解成氨 培养基碱性增强 酚红变红 脲酶阳性 1、酚红培养基： 用途:鉴定分解尿素的细菌 分解尿素的细菌—酚红指示剂 三、鉴定：（筛选后必鉴定） 原理：代谢产物与伊红—美