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第九讲 发酵工程 发酵工程及特点 古老的新技术:发酵技术发展历程 发酵原理:人类如何利用微生物 发酵产品的生产:现代发酵工业 发酵工程及特点 发酵的概念 发酵工程的特点 发酵的概念 发酵(Fermentation)英文来自拉丁语ferver,意思是“发泡”.描述果汁或谷物发酵时产生CO2的现象.实际上,在后来的啤酒 果酒生产中,起泡现象一直作为重要的直观指标. 发酵的概念 巴斯德认为:发酵是酵母在无氧状态下的呼吸过程,是生物获得能量的一种形式. 发酵的概念 现代发酵定义:利用微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制造产品的过程. 葡萄糖代谢 发酵的特点 微生物的共性 发酵工程的特点 微生物的共性 体积小,面积大 吸收多,转化快 生长旺,繁殖快 适应强,易变异 分布广,种类多 发酵工程的特点 反应条件温和:常温常压 原料来源广泛并无需精制 众多反应都在同一发酵罐内完成 发酵技术发展历程 古代发酵 近代发酵 现代发酵 古代发酵 距今8000至4500年前开始(中国), 距今4000至3000年前开始(外国) 特点 只知现象,不知本质 产品 米酒 啤酒 近代发酵—纯培养技术的建立 巴斯德(Louis Pasteur,1822-1895)于1857年 发现了发酵是由微生物引起的,从而使传统的经验发酵变成了一门科学. 巴斯德发明的消毒器 现代化工厂仍采用巴氏消毒法 人们心中的巴斯德 近代发酵—纯培养技术的建立 布雷费尔德 (Brefeld)于1872年创立了霉菌纯培养技术. 丹麦科学家汉逊(Hansen)1878年创立了酵母纯培养技术 德国科学家科赫 (Robert Koch,1843-1910)于1881年创立了细菌纯培养技术. 近代发酵—纯培养技术的建立 上述技术突破,人们可以控制发酵进程,从而使发酵技术从天然发酵走向纯种发酵.完成了发酵技术的第一次转折. 主要产品:酒精 甘油 丙酮-丁醇 现代发酵 通气搅拌发酵 代谢控制发酵 基因工程菌发酵 通气搅拌发酵 英国科学家弗莱明(A.Fleming),1929年发现了青霉素 英国科学家弗洛里(Haward.Flory)和钱恩(E.B.Chain)精制分离出青霉素(1940年) 第二次世界大战对青霉素的急切需求推动了工业化生产(1944年) 技术关键 无菌空气制备,通风搅拌发酵 代表产品 青霉素 意义 完成了发酵技术的第二次技术转折 代谢控制发酵 代谢控制发酵 1959年木下祝郎发明了用微生物发酵发生产谷氨酸. 味精的分子式为: HOOC-(CH2) 2CHNH2COONa.H2O 技术特点 从DNA分子水平上控制(无定向诱变)微生物代谢途径,进行最合理代谢.该技术的发展完成了发酵技术的第三次转折. 代表产品 :氨基酸 核苷酸等 基因工程菌发酵 1970S以来基因工程技术的飞速发展,为发酵工程技术插上了腾飞的翅膀,人们可以定向改变生物的性状和功能,创造新的“物种”,是发酵工业能够生产出超出自然界微生物所不能合成的产物. 技术特点:可定向改造生物基因,按人们的意志生产产品. 意义:将引起发酵工程的技术革命. 产品:人生长素,干扰素,疫苗 发酵原理与机制 黄色短杆菌赖氨酸的合成与调节机制 细胞膜通透性的改造 发酵中如何控制关键条件 回忆一个概念 反馈抑制:代谢途径的末端产物(即终产物)过量时,这个产物反过来直接抑制该途径第一个酶的活性,使整个反应过程减慢或停止. 反馈抑制 协同反馈抑制 分支代谢途径中的几个末端产物同时过量时才能抑制共同途径中的第一个酶的一种反馈调节方式.单独一种产物过量并不能引起抑制作用. 协同反馈抑制 黄色短杆菌生物合成Lys调节机制 三羧酸循环 黄色短杆菌生物合成Lys调节机制 酶3活性比酶2高15倍,代谢优先生成高丝氨酸 酶4活性比高丝氨酸激酶高,代谢优先向蛋氨酸方向进行 蛋氨酸过量反馈阻遏酶4,3的合成 异亮氨酸过量反馈抑制酶5的活性 苏氨酸过量反馈抑制酶3的活性,并且与过量赖氨酸协同抑制酶1的活性 积累赖氨酸的菌株特性 通过基因突变使酶3失去活性,切断向苏氨酸方向的代谢流 在培养液中加入限制量的高丝氨酸(或苏氨酸和蛋氨酸) 细胞膜通透性的改造 用能积累谷氨酸菌株做如下实验: 生物素充足时,细胞内含大量谷氨酸,但培养液里几乎不含谷氨酸. 用溶菌酶消化细胞壁得到的原生质体仍不分泌谷氨酸. 当把原生质体放入低渗溶液里,将其涨破,谷氨酸才排出. 生物素亚适量时,培养液里含大量谷氨酸,细胞里含量少. 结论 谷氨酸的分泌是由细胞膜控制 细胞膜的结构怎样? 磷脂分子形成细胞膜 磷脂分子结构式 生物素缺陷型可分泌谷氨酸 营养缺陷型: