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观止矣 PAGE \* MERGEFORMAT4 林木蛋白质工程总复习 名词解释 定点突变：在已知结构的天然蛋白质分子多肽链内的确定位置上，进行一个或少数几个氨基酸残基的改变，如置换、删除或插入氨基酸。 蛋白质的化学修饰：通过活性基团的引入或去除使蛋白质一级结构发生改变的过程。 DNA改组技术：在单个基因中引入突变，使结构相关的几种基因进行体外重组，共同进化出一种新的蛋白质。 基因融合：不同的基因或者基因片段序列构成一个新的杂合基因，经合适的表达系统表达后，获得由不同功能蛋白质拼合在一起的新型多功能蛋白。 易错PCR：通过改变正常PCR体系中某些组分的数量和质量，随机引入错误碱基而创造序列多样性的DNA序列文库，从而利用PCR技术简便快速地在DNA序列中随机制造突变的方法。 熔球态：蛋白质从线形的肽链折叠为特定立体三维结构过程中的过渡态。具有天然二级结构，但三级结构却不完整；比天然态有较多的疏水区域暴露；当熔球态变性到伸展态时，温度跃迁消失。 X射线晶体衍射：当一束单色X射线入射到晶体分子时，一部分射线穿过晶体，一部分散射并相互抵销，一部分在某些特殊方向上的X射线产生强衍射，并由与计算机相连的检测器检测，从而计算出原子间的距离、键角、分子的立体结构等。 分子筛层析：以多孔性凝胶材料为支持物，当蛋白溶液流经此支持物时，分子大小不同的蛋白质因所受的阻滞作用不同而先后流出，从而达到分离纯化的目的。 离子交换层析：蛋白质是两性分子，在一定pH条件下带有电荷，不同的蛋白质带有电荷的种类和数量不同，因此它们与带电凝胶颗粒间的电荷相互作用不同。利用蛋白质和带电凝胶的作用力的差别把蛋白分开的层析方法叫离子交换层析。 亲和层析：利用蛋白质与配体专一性识别并结合的特性而分离蛋白质的一种层析方法。 等电聚焦（IEF）：根据蛋白质等电点不同，人们将两性电解质添加到聚丙烯酰胺凝胶中，在电场作用下，不同pH的两性电解质在凝胶中成梯度分布。带有电荷的蛋白质样品在此凝胶中移动，当其移动到与其等电点相同的pH梯度后静电荷为零，在凝胶中不再移动，通过这种方法把不同等电点???蛋白分开。 蛋白质芯片：也叫蛋白质微阵列，将大量蛋白质有规则地固定到某种介质载体上，利用蛋白与蛋白、酶与底物、蛋白与其他小分子之间的相互作用检测分析蛋白质的一种芯片。 噬菌体展示技术：最近新兴起的一种基因表达筛选技术，将目的基因克隆在丝状噬菌体衣壳蛋白的基因中，使外源基因产物与衣壳蛋白融合，伸展在噬菌体表面，可直接用来检测表达产物的某些活性。 简答 什么是蛋白质的折叠？ 答：是一个从一级结构生成三级结构的复杂过程。包括多肽链中两个氨基酸残基的接触、螺旋-链-环的转变、二级结构的初步形成、疏水塌缩、侧链簇集、折叠中间体的形成、脯氨酸的顺反异构等。 简述蛋白质分子设计的分类。 答：（1）定点突变或化学修饰：在已知结构的天然蛋白质分子多肽链内的确定位置上，进行一个或少数几个氨基酸残基的改变或进行化学修饰，如置换、删除或插入氨基酸。最广泛使用，又叫“小改”； （2）拼接组装设计法：对来源不同的蛋白质结构域进行裁剪、拼接、组装，以期望能转移相应的功能，获得具有新特点的蛋白质。又叫“中改”； （3）从头设计全新蛋白质：从头设计一个全新的、自然界不存在的蛋白质，使之具有特定空间结构和预期功能。又叫“大改”。 简述蛋白质的分子生物学改造。 答：（1）通过基因突变的方法：包括 = 1 \* GB3 ①定点突变法，即在已知蛋白所对应的DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段，通过改变基因最终达到改造蛋白质的方法。 = 2 \* GB3 ②定向进化法，即在实验室模仿达尔文自然进化选择的关键步骤，如突变、重组和筛选，在较短时间内完成漫长的自然进化过程，有效地改造蛋白质，使之适于人类的需要。 （2）通过基因融合的方法改造：不同的基因或者基因片段构成一个新的杂合基因，经合适的表达系统表达后，获得由不同功能蛋白质拼合在一起的新型多功能蛋白的方法。 简述原核生物表达载体的一般特点。 答：（1）都具有复制起始点，绝大多数载体利用pBR322或pUC质粒来源的复制起始点，该起点决定了细胞内质粒的拷贝数。 （2）都有选择性基因：至少含有一个选择性基因，保证对转化体的筛选和培养过程中受体细胞质粒不丢失。 （3）强的、可诱导的启动子：原核生物启动子包括了RNA聚合酶的识别位点和结合位点。 （4）强的转录终止序列：有效的转录终止子是表达载体必不可少的元件。 （5）核糖体结合位点：位于启动子下游、翻译起始密码子上游，该SD序列结合位点对原核细胞mRNA翻译起始非常关键。 （6）适合的多克隆位点：可以将目标基因插入到表达载体；用于构建或改造载体。 简述影响热稳定性的因素。 答：影响热稳定性的因素有很多，如堆