人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》课件共41张PPT.ppt

(1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中 洗脱出来的是__________，原因是__________。 (2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部 d位置相当于多孔板的结构可由________________________替代。 (3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存 在，原因是_________________________________。 (4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体________(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是________________________。 (5)若选用SephadexG-75，则“G”表示________，75表示________。 [解析]　本题主要考查凝胶色谱法的原理和操作注意事项，可按以下思路进行分析作答。 (1)原理：由于不同蛋白质其相对分子质量不同，相对分子质量较大的蛋白质不能进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程短，速度快，易洗脱；相对分子质量较小的则进入凝胶内部通道，路程长，速度慢。 (2)注意事项： ①凝胶色谱柱的制作：底部橡皮塞的凹穴上覆盖尼龙网和100目的尼龙纱，相当于多孔板。 ②凝胶色谱柱的装填：装填时尽量紧密，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ③装填材料即交联葡聚糖凝胶的特点及表示方法。 ④样品的加入和洗脱：洗脱时和浸泡凝胶所用液体均是物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液，洗脱时，对洗脱液的流速要求保持稳定。 [答案]　(1)a　a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快 (2)尼龙网和尼龙纱 (3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 (4)相同　保持稳定 (5)凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围　凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g (1)实验结果如果不理想，需要重做时，必须进行凝胶色谱柱的重新装填。一般情况下，凝胶不会与其他溶质发生任何作用，因此，在一次分离以后，稍加平衡就可以进行下一次的操作。平衡时，需用3倍柱体积的洗脱液过柱。 (2)如果实验操作中有一些杂质污染了色谱柱，可以用物质的量浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠和物质的量浓度为0.5 mol/L的氯化钠混合液处理交联葡聚糖凝胶。 (3)如果凝胶长期不用，可以加入抑菌剂低温保存，使用时再进行充分的平衡。 点击进入 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 1.透析法分离蛋白质的目的是除去小分子 杂质。 2．利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对 分子质量大的先洗脱出来，相对分子 质量小的后洗脱出来。 3．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分 子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。 4．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速率完全取决于分子 的大小。 5．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理与粗分 离、纯化和纯度鉴定。 6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 [自读教材·夯基础] 形状和大小 电荷 亲和力 1．蛋白质分离的理论依据 2．分离的方法 (1)凝胶色谱法：根据 分离蛋白质的一种有效方法，也称做 法。 (2)电泳： ①概念：指 在电场的作用下发生 的过程。 ②原理：在一定的 下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上 ，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 相对分子质量的大小 分配色谱 带电粒子 迁移 pH 正电或负电 相反 ③影响电泳效果的因素： 带电性质 大小