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FASTPlaqueTB Test principles and procedure (including specimen processing) 试验原理、操作程序 （含标本处理） FASTPlaqueTB 用于检测痰液标本中结核分枝杆菌复合群试验包括： 痰液去污染处理 2天内得到可靠结果 采用FASTPlaque 原理检测活的MTB菌 目录 标本处理 FASTPlaqueTB操作程序 结果解释 痰液处理 为什么要进行痰液处理 痰液处理的要求和所需试剂 操作程序 影响因素分析 为什么要进行痰液处理 去污染 抑制某些污染细菌，以防止其在平板上过度生长 痰液液化 使标本更易于操作，释放TB杆菌，并使TB杆菌更易为特异性噬菌体感染 浓缩MTB细胞 去除痰液中某些抑制因子 FASTPlaqueTB 试验对未处理痰液效果不好 Disadvantages of specimen processing 痰液处理的缺点 通常采用的痰液处理方法依赖于NaOH破坏污染菌、液化痰液。 Petroffs (4%NaOH) 或 NALC-NaOH (2% NaOH) NaOH 对 MTB亦有损伤 最高可破坏90％的活细胞 推荐采用较低浓度的NaOH处理痰液 低NaOH方法需要采用NALC(N-acetyl-L-cysteine)为辅助 NALC-NaOH 仅推荐用于 FASTPlaqueTB 试验 Effect of higher NaOH concentration FASTPlaqueTB 痰液处理的其它步骤 NALC-NaOH处理后，采用以下步骤修复MTB： 洗涤两次以除去残余的NaOH 磷酸缓冲液 – already part of NALC-NaOH procedure FPTB Medium Plus 修复 37°C孵育过夜 修复细胞，使其易于为MTB感染 修复过程中，MTB细胞无明显生长现象 痰液处理的要求 NALC NaOH 柠檬酸钠 Na2HPO4 (无水) KH2PO4 (无水) 纯净水 高压灭菌设备 分装设备 (50-1000ml) 电子秤 量筒 无菌离心管* 离心机# 漩涡振荡器 废物桶 储液 NALC-NaOH 溶液 添加NALC 后，可稳定保存 24 小时 磷酸缓冲液 (pH 6.8) 详见使用说明 痰液处理方法 (NALC-NaOH) 室温下用NALC-NaOH 处理 痰液15 mins 磷酸缓冲液中和 2000g 离心 20 mins Do not allow to stand for long period in phosphate buffer prior to centrifugation 弃去上清液 用FPTB Medium Plus 洗涤 弃去上清液 用 FPTB Medium Plus 重悬，37°C孵育过夜 痰液处理程序 离心的影响因素 Necessary to concentrate cells and to permit washes Optimal centrifugation leads to maximum recovery of MTB If low speed spins are used, longer centrifugation periods are required to gain same sedimentation Centrifuge may heat up during use leading to loss of MTB viability Centrifuge tube considerations Use of centrifuge tubes of lower volume may necessitate some modifications to procedure. Select the most mucopurulent portion of specimen, and process Decant to only 1/6 of tube volume Add equal volume of NALC-NaOH solution Add phosphate buffer to remaining 2/3 of tube Spin and continue as per protocol (including 15ml FPTB Medium Plus) Specimen considerations Sputum volume Use up to 10ml If 10ml, use the most mucoid or purulent part of the specimen Sputum transport – minimise d