心肌再灌注损伤中neca对内质网应激及凋亡的影响-护理学专业论文.docx

TheEffectofEndoplasmic ReticulumStressand ApoptosisinMyocardialProtectionbyNECADissertationSubmittedtoHebeiUnitedUniversityinpartialfulfillment ofthe requirement forthe degreeofMasterofMedicine byGaoYing (Nursing)Supervisor:ProfessorXingFengmeiJune, 2014独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□授学位之日起□自年月日起作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的本课题主要研究ERS及其诱导的细胞凋亡是否参与了腺苷受体激动剂NECA的心脏保护作用并初步探讨其可能的机制。方法本实验首先选取清洁级Wistar大鼠56只，分为正常对照组（Control组）、缺血/再灌注组（I/R组）、NECA组及TUDCA组四个组，利用心脏Langendorff 灌流装置制备大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型，使用RM6240BD型多道生理信号采集系统监测并记录稳定期、缺血期及再灌注过程中心率、左心室发展压等血流动力学参数并测定该过程中的冠脉流量，从而反映心脏功能的变化。其次，用免疫印迹（Westernblot）法检测ERS伴侣蛋白GRP94及其致细胞凋亡的标志性分子CHOP的蛋白表达情况。另外，用TUNEL法对心肌细胞的凋亡情况进行观察；用透射电镜观察心脏超微结构的变化；HE染色观察心脏病理组织学的变化情况。结果1 多道生理记录仪采集结果显示：离体大鼠心脏缺血及再灌注时，冠状动脉流量（coronaryflow,CF）、心率（heartrate,HR）及左室发展压（leftventricular developedpressure,LVDP）明显下降（P0.05），舒张末压（enddiastolicpressure, EDP）显著升高（P0.05）。而再灌注时给予NECA（100nmol/L），可以明显增加冠状动脉流量、心率及左室发展压（P0.05），且能使舒张末压显著降低（P0.05）。提示NECA能够改善再灌注时心脏的功能。2用Westernblot方法检测离体大鼠心脏再灌注时内质网应激标志性分子GRP94的蛋白表达情况，结果显示，与Sham组相比，再灌注时，I/R组GRP94的表达显著升高（P0.05），提示心肌缺血/再灌注能够诱发内质网应激的发生。而再灌注前5min给予NECA后，GRP94的表达较I/R组明显下降（P0.05），此种变化趋势与给予内质网应激的抑制剂TUDCA（30μmol/L）后的变化趋势一致，说明NECA能够抑制内质网应激从而对缺血/再灌注损伤的心脏产生保护作用。另外用Westernblot方法检测离体大鼠心脏再灌注时内质网应激诱导凋亡的特异性转录因子CHOP的蛋白表达情况，结果显示，与Sham组相比，再灌注时，I/R 组CHOP的表达显著升高（P0.05），提示心肌缺血/再灌注时发生了内质网应激相关的细胞凋亡。而再灌注前5min给予NECA后，CHOP的表达较I/R组明显下降（P0.05），此种变化趋势与给予内质网应激的抑制剂TUDCA后的变化趋势一致，说明NECA能够抑制内质网应激相关的细胞凋亡从而对缺血/再灌注损伤的心脏产生保护作用。且再灌注120min时，NECA 组CHOP的表达低于TUDCA组（P0.05），说明NECA抑制心肌缺血/再灌注引发-I-河北联合大学硕士学位论文的细胞凋亡可能并不只是通过抑制内质网应激相关的细胞凋亡这一通路完成的。3透射电镜结果显示，离体大鼠心脏再灌注30min时，Sham组心肌细胞线粒体沿肌丝长轴排列整齐，外膜完整，嵴密集，内质网形态正常；I/R 组心肌细胞出现了广泛的线粒体损伤，线粒体排列紊乱，嵴消失，水肿，或成空泡样变性，内质网扩张明显；而给予NECA或TUDCA后，线粒体损伤程度减轻，除部分线粒体有改