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晚期糖基化终末产物和骨髓间充质干细胞对血管内皮细胞vegf信号通路的影响及其机制探讨-内科学专业论文
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应法律责任。、研究生签名:夏瑜导师签章锛级学院领导革亭:、b/夕年巫月/日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名:易瑜挪签章:獬聋≯侄年弓月7训日万方数据目录中文摘要l英文摘要...3英文缩写6研究论文晚期糖基化终末产物和骨髓间充质干细胞对血管内皮细胞 VEGF信号通路的影响及其机制探讨前言刖舌......77材料与方法...8结果..18附图..20讨论..24结论..27参考文献.27综述血管内皮生长因子受体在血管新生中的作用研究进展30致谢...39个人简历..40万方数据中文摘要晚期糖基化终末产物和骨髓间充质干细胞对血管内皮细胞VEGF信号通路的影响及其机制探讨摘要目的:以人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)为实验对象,通过晚期糖基化终末产物(advancedglycationendproducts,AGEs)干预以及人骨髓间充质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSCs)与HUVEC共培养,应用Western blot、PCR等方法检测内皮细胞中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及其受体和下游P13K/AKT/eNOS信号通路的表达变化,探讨VEGF信号通路在糖尿病大血管病变血管新生障碍中的病理改变和机制以及间充质干细胞对糖尿病患者血管新生促进作用的影响机制。方法:人脐静脉内皮细胞、人骨髓间充质干细胞常规培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。实验分三组:AGE组、AGE+MSC共培养组,空白对照组(不加任何刺激因素)。对照组常规培养HUVEC;AGE组以400ug/ml浓度的AGE与HUVEC共孵育36小时f已经通过预实验确定AGE最佳干预浓度和干预时间,具体见后。);AGE+MSC共培养组在400ug/ml AGE环境下将MSC与HUVEC共培养36小时。36小时后提取各组HUVEC的蛋白和mRNA并留取细胞培养上清液备用。采用Westernblot、PCR方法检测3组内皮细胞的VEGF、VEGFR-1(Fit。1)、VEGFR-2(KDR/Flk-1)、sFlt-1(soluble VEGFR-1)、p-AKT、P—eNOS的表达。统计学方法采用SPSSl7.0软件包进行数据分析,计量资料以均数4-标准差(x士s)表示,两组之间的比较采用独立样本t检验,P0.05即认为有统计学意义。结果:1 AGE影响VEGF—A和VEGFR的表达AGE干预后,内皮细胞VEGFA、sFlt-1 mRNA表达(3.747土0.415)与对照组(1.007:k0.139)相比升高,差异有统计学意义(氏0.05);VEGFR-2 mRNA表达与对照组相比减弱,差异有统计学意义(PO.05);400ng/mlAGE干预36小时后,内皮细胞VEGFR-1蛋白表达万方数据中文摘要(93.129+4.620)与对照组(557.395士9.383)相比下降,差异有统计学意义(火O.05);VEGFR-2蛋白表达(63.791圭7.98)与对照组(57i.995土12.65)相比下降,差异有统计学意义(P0.05)。2 AGE影响P13凇T/eNOS信号通路的表达400ng/ml AGE干预36小时后,内皮细胞P。AKT蛋白表达(86.408土3.255)与对照组(482.325士39.859)相比减弱,差异有统计学意义(P0.05);p-eNOS蛋白表达(187.69-圭:20.732)与对照组(426.96士50.063)相比亦减弱,差异有统计学意义(P0.05)。3与MSC共培养对内皮细胞VEGFR的表达的影响AGE干预后,内皮细胞sFlt.1 mRNA表达与对照组相比升高,经与MSC共培养后,sFlt.1 mRNA(2.048士0.245)表达与AGE组相比下降(户0.05):AGE干预后,内皮细胞表面VEGFR-1与正常对照组相比表达下降,经与MSC共培养后,VEGFR-1(319.4
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