第12次实验凝集反应.pptVIP

免疫学实验一  免疫血清的制备 凝集反应 学习要求 1. 了解免疫血清的来源和分离方法； 2. 熟悉抗原抗体试验的种类； 3. 掌握凝集反应的种类和基本原理； 4. 掌握玻片凝集试验原理、方法和注意事项； 5. 掌握试管凝集反应原理、方法和注意事项； 6. 掌握间接凝集抑制试验原理、方法和注意 事项。 抗血清制备 1.抗原的制备 2.动物的选择 3.免疫剂量、途径、间隔时间 4.抗血清效价鉴定 5.Ig的提取、纯化 小结 1. 抗血清制备 2. 直接凝集反应 3. 间接凝集反应 * * 实验内容 1.免疫血清的制备—讲解 2.抗原抗体反应的类型和特点 3.玻片凝集反应—每人做 4.试管凝集反应—每组做 5.间接凝集抑制试验—示教 Ag Ab 大型动物 免疫 产生 分离动物血清 免疫血清（Ig提取） 玻片凝集试验 1.原理 将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质（如细菌、红细胞等）混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。该法为定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、菌种的鉴定和分型等。 2.方法 生理盐水 伤寒诊断血清 痢疾诊断血清 + + + 待检菌 待检菌 待检菌 3.注意事项： （1）生理盐水、诊断血清用接种环取； （2）待检菌为肠道致病菌，注意无菌操作， 玻片用后放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂； 待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽，否则影响结果观察。 4.结果观察与判断 5.实验结果 待检菌 待检菌 待检菌 + + + 生理盐水 伤寒诊断血清 痢疾诊断血清 6.结论 试管凝集试验 1.原理—该法因凝集反应发生在试管内而得名。通常用已知的颗粒性抗原来检测未知抗体及其相对含量，为半定量测抗体的实验。方法是用生理盐水将待测血清在试管中进行连续倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，37?过夜后，观察有无凝集并根据凝集情况判定血清抗体的效价。 本法主要用于某些传染病的辅助诊断及流行病学调查，如诊断伤寒、 副伤寒的肥达反应；诊断斑疹伤寒等立克次体病的外斐反应等。此外，也可用于红细胞凝集试验测定天然血型抗体的效价以制备抗A、抗B标准血清。 2.方法 试管号 1 2 3 4 5 6 7（对照） 生理盐水（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 待检血清（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 —弃去0.5 (1:10) 伤寒菌液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清终末稀释度1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 — 37 ℃过夜，观察结果。 凝集程度判定以“＋”、“－”号表示如下： ++++上清完全透明，细菌全部形成凝集块； +++ 细菌绝大部分凝集，液体有轻度混浊； ++ 50％细菌形成凝集，液体半澄清； + 仅少量细菌凝集，液体比较混浊; ―液体均匀混浊，无凝集（部分菌体因静置而沉于管底，经摇后如云烟状升起，很快消失）。