强化面粉营养素检测的方法.pptVIP

1.原理 核黄素在440-500nm波长光照射下发生黄绿色荧光，在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S2O4),将核黄素还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。 * 2.试剂 1. 硅镁吸附剂：60-100目 2. 2.5mol/L无水乙酸钠溶液 3. 10%木瓜蛋白酶：用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。使用时现配制。 4. 10%淀粉酶：用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。使用时现配制。 5. 0.1mol/L盐酸 6. 1mol/L氢氧化钠 7. 0.1mol/L氢氧化钠 8. 20%低亚硫酸钠溶液。使用时现配制。 9. 洗脱液：丙酮：冰乙酸：水（5：2：9） 10. 0.04%溴甲酚绿指示剂 11. 3%高锰酸钾溶液 12. 3%过氧化氢溶液 13. 核黄素标准液的配制（纯度98%） 13.1. 核黄素标准储备液（25ug / mL) 13.2. 核黄素标准使用液：吸取2.00mL核黄素标准储备液，置于50mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度。避光，贮于4°C冰箱，可保存一周。此溶液每毫升相当于1.00ug核黄素 * 3.仪器与设备 1.实验室常用设备 2.高压消毒锅 3.电热恒温培养箱 4.核黄素吸附柱 5.荧光分光光度计 * 4. 操作步骤： 样品均制→水解→过滤定容→氧化去杂质→净化→测定→结果计算 * 4.1样品提取 4.1.1 水解: 称取2-10g样品（约含10-200ug核黄素）于100ml三角瓶中，加入50mL 0.1mol/L盐酸，搅拌直至颗粒分散均匀。用40mL瓷坩埚为盖扣住瓶口, 置于高压锅内高压水解，10.3X104Pa(15lb/in2)30min。水解液冷却后，滴加1mol/L氢氧化钠，取少许水解液，用0.04%溴甲酚绿检验呈草绿pH为4.5 4.1.2酶解: 含有淀粉的水解液：加入3ml 10%淀粉酶溶液,于37-40℃保温16h。含高蛋白的水解液：加入3ml 10%木瓜蛋白酶溶液,于37-40℃保温16h。过滤上述酶解液定容至100mL,用干滤纸过滤。此提取液在4°C冰箱中保存一周 * 4.2氧化去杂质 视样品中核黄素的含量取一定体积的样品提取液及核黄素标准使用液（约含1-10ug核黄素）分别于20mL的带刻度试管中，加水至15mL。各管加0.5mL冰乙酸，混匀。加3%高锰酸钾溶液0.5mL，混匀，放置2min，使氧化去杂质。滴加3%双氧水溶液数滴，直到高锰酸钾颜色褪掉。剧烈震摇此管，使多余的氧气逸出。 * 4.3核黄素的吸附与洗脱 核黄素吸附柱：硅镁吸附剂约1g用湿法装入柱，占柱长1/2-2/3（约5cm）为宜（吸附柱下端用一团脱脂棉垫上），勿使柱内产生气泡，调节流速为60滴/min。 过柱与洗脱：将全部氧化后的央液及标准液通过吸附柱后，用约20mL的热水洗去样液中的杂质，然后用5.0mL洗脱液将样品中核黄素洗脱并收集与一带盖10mL刻度试管中，再用水洗吸附柱，收集洗出之液体并定容至10mL，混匀后待测荧光。 * 4.4 测定 于激发波长440nm，发射波长525nm，测量样品管及标准管的荧光值。 待测品及标准的荧光值测定后，在各管的剩余液（约5-7mL）中加0.1mL 20%低亚硫酸钠溶液，立即混匀，在20s内测出各管的荧光值，作为各自的空白值 * 5.计算 X=(A-B/C-D) ×S/m×f×100/1000 式中：X ——样品中含核黄素的量,mg/100g A ——样品管荧光值 B ——样品管空白荧光值 C ——标准管荧光值 D ——标准管空白管荧光值 f ——稀释倍数 m ——样品的质量，g S ——标准管中核黄素的含量, μg 100/1000——将样品中核黄素量由μg/g折算 mg/100g的折算系数。 * 食物中烟酸的测定微生物法GB/T 5009.89-2003 * 1.原理 某