第四周酶的理化性质影响酶活性的因素.ppt

生物化学实验 影响酶活性的因素 实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。 观察不同底物、温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 实验原理 淀粉在唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麦芽糖酶）的作用下被逐步水解成单糖，水解的中间产物遇碘呈现不同的颜色： 淀粉→不同大小分子的糊精→麦芽糖、葡萄糖 蓝色 紫色→暗褐色→红色 不变色 根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否已完全，观察底物、温度、pH及激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 试剂和器材 1. 试剂 新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、 0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）、 1％氯化钠溶液、1％硫酸铜溶液、碘液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、0.1 mol/L柠檬酸溶液 2. 器材 恒温水浴锅、4度冰箱、电磁炉(沸水锅) 纸杯、试管、试管架、锥形瓶，pH试纸 一、酶的特异性 实验目的：了解酶的特异性并掌握酶特异性的检测方法和原理。 实验原理： 酶的特异性是指一种酶只能对一种或一类化合物（此类化合物通常具有相同的化学键）起作用，而不能对别的化合物起作用。 本实验以唾液淀粉酶对淀粉的作用为例，说明酶的特异性，淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。 淀粉和蔗糖都无还原性，但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖，均为还原性糖，糖类的醛基或酮基能与Benedict试剂反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。 试管编号 试剂处理 #1 #2 含0.3％NaCl的淀粉溶液（mL） 3 － 2% 蔗糖溶液（mL） — 3 Benedict试剂（mL） 2 2 摇匀，沸水浴煮沸3min 记录观察结果 2、检查试剂 （取2只试管，按下表操作） 1、唾液淀粉酶液的准备 实验者用蒸馏水嗽口，除去食物残渣。然后含一口蒸馏水于口中，轻嗽一分钟，吐入小烧杯中。将其稀释一倍。 操作步骤 3. 淀粉酶的专一性实验 试管编号 试剂处理 #1 #2 已稀释的唾液溶液（mL） 1 1 含0.3％NaCl的0.5%淀粉溶液（mL） 3 － 2%蔗糖溶液（mL） — 3 摇匀，置37℃水浴保温15min Benedict试剂（mL） 2 2 摇匀，沸水浴煮沸2min 记录观察结果 （取2只试管，按下表操作） 二、pH对淀粉酶活性的影响 实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 实验原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。 操作步骤 1. 取3个锥形瓶，按下表比例移取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的三种缓冲溶液。 锥形 瓶号 0.2M磷酸氢二钠 （mL） 0.1M柠檬酸 （mL） 缓冲液pH 1 2 3 5.15 7.72 9.72 4.85 2.28 0.28 5.0 6.8 8.0 2、另取3只干净试管，按下表操作。 试管编号 试剂处理 #1 #2 #3 pH5.0缓冲溶液（mL） 2 - - pH6.8缓冲溶液（mL） - 2 - pH8.0缓冲溶液（mL） - - 2 含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（mL） 1 1 1 每隔1min逐管加入唾液稀释液1 mL，摇匀 充分摇匀，置37 ℃水浴保温10min，到达保温时间后，每隔1min依次取出 立即加碘化钾－碘溶液/滴 2 2 2 记录观察结果 三、温度对淀粉酶活性的影响 实验目的 了解温度对酶活性的影响及最适温度的定义。 实验原理 对温度敏感是酶的一个重要特性，酶作为生物催化剂也有温度效应，提高温度可以提高酶促反应速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间的长短有关系。 操作步骤 1. 取3支试管，各加2mL 含0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液。 2. 另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。 3. 将此6支试管分为3组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支。 4. 三组试管分别置入0℃、37℃与100℃的水浴中。 5. 等5min后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立即滴加2滴碘液，观察溶