2019高考总复习生物（人教版）讲义：第十二单元+生物技术实践+第39讲+微生物的培养与应用+Word版含答案.docVIP

第39讲　微生物的培养与应用 1．微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面的应用。 考点一　培养基及微生物的纯化培养技术 (对应学生用书P256) 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对__营养物质__ 的不同需求，配制出供其__生长繁殖__的营养基质。 (2)营养组成：一般都含有__水、碳源、氮源__和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对__pH__、氧气以及__特殊营养物质__的要求。 (3)种类：按照物理性质可分为__液体__培养基和固体培养基。 2．无菌技术 (1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止__杂菌污染__的方法。 (2)关键：防止__外来杂菌__的入侵。 (3)不同对象的无菌操作方法(连线) 3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①操作步骤 →→→→ ②倒平板的方法及注意事项 a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：__丙→乙→甲→丁__。 b．甲、乙、丙中的灭菌方法是__灼烧灭菌__。 c．丁中的操作需要等待__平板冷却凝固__才能进行。 (2)纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到__由一个细胞繁殖而来__的肉眼可见的__菌落__，即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤：__接种__。 ③常用的微生物接种方法有两种 a．平板划线法：是通过__接种环__在琼脂固体培养基表面__连续划线__的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 b．__稀释涂布平板__法：是将菌液进行一系列的__梯度稀释__，然后将__不同稀释度__的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种，可以采用__临时保藏__的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用__甘油管藏__的方法。 1．消毒和灭菌的比较 项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理 化因素　 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具 高压蒸汽灭菌法 培养基及容器的灭菌 2.纯化微生物的接种方法 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 原理 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基上。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 适用范围 适用于好氧菌 适用于厌氧菌和兼性厌氧菌 走出微生物培养的4个误区 (1)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同 ①第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。 ②每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。 ③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。 (3)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。 (4)倒平板的温度一般在50 ℃左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。 1．(2016·全国卷Ⅲ)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题： (1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用____________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是____________________________________________________________。 (2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有____________________和____________________。分离纯化时应挑选出____________________的菌落作为候选菌。 (3