微生物论文 自来水中细菌总数的测定.docVIP

自来水中细菌总数的测定 摘 要：关键字：自来水 平板菌落计数技术 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板。对自来水用平板菌落技术测定细菌总数从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。 1 材料与方法1.1 本实验于2010年10月26,27日在太原师范学院南区实验楼微生物实验室完成。` 1.2 材料 1.2.1实验材料自来水 实验试剂牛肉膏蛋白胨NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl 蒸馏水 1.2.3实验仪器高压蒸气灭菌锅 培养皿 三角烧瓶 天平 量筒 玻璃棒 电炉匙 pH试纸（pH5.5-9.0）1.3 实验方法 1.3.1 灭菌 1..1.1 首先将内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 1..1.2 放回内锅层,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、吸管。 1..1.3 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。 1..1.4 用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。 1..1.5 灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 1..2 水样的采取 放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。 1.3 制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.3.1 称量 按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 1.3.2 溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 1.3.3 调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。 1..4 细菌总数测定 1..4.1 灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。共做两个平皿。 1..4.2 分别倾注溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使自来水和培养基混匀。 1..4.3 另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基，作空白对照。 1..4.4 待培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数即为1mL自来水的细菌总数。.1.1 菌落照片 2.1.2 实验数据表 自来水中菌落数表实验数据 平板序号 1 2 菌落数目（个） 75 44 自来水中细菌总为（83+75）/2-44=35 2.2分析 实验中对照组的菌落数为44，可见培养基和培养过程中造成了杂菌污染。处理上表中数据知，该自来水中细菌平均数为35,在国家饮用水标准范围之内。 3讨论 在本实验中的空白对照培养基上长了细菌菌落，说明此培养基被污染了，杂菌来源可能是由于培养皿、三角烧瓶、吸管等仪器灭菌不充分；灭菌后在空气中放置又落入杂菌；无菌操作技术不当，培养基倾入培养皿后没有立即加盖；配置培养基时反复升降温，使一些杂菌产生抗性等。倾注培养基后皿在桌面上做匀速旋转，使培养基和自来水样摇匀，没有摇匀在培养基中可见一些菌苔。由于菌种在固体培养基上借助重力作用而形成的，所以观察到绝大多数的细菌着生在培养基表面［］。培养皿、三角烧瓶、吸管（）倒置培养基时应降温至45 ℃，温度过高会烫死大肠杆菌，过低会使培养基凝固。 （）倾注培养基后要将平皿在桌面上做匀速旋转，将培养基和自来水样摇匀，在培养基中观察时可见一些菌苔就是平皿没有摇匀的结果［］。 （）培养基不能反复升降温，倾入培养皿后应立即加盖，且灭菌后不应在空气中放置，以免杂菌混入。 （）应在高温时在对照组中倒入培养基，否则对照组中会出现大量的菌落［］。）在数菌落时，菌落太小且又处于培养基内部这样就不能观察到菌落从而影响结果； 在培养过程中由于细菌之间的相互抑制也会使计数菌落减少。因此，只有在实验不需要精确的