第六章_单倍体细胞培养.ppt

第六章 单倍体细胞培养 本章重难点 单倍体在遗传和育种中的应用价值 培养条件下小孢子的发育途径 影响花药培养的因素 小孢子培养与花药培养的优势体现在哪些方面 概念：花粉的二型性 第一节 单倍体的起源和遗传行为 3、单倍体植物的特点 体细胞染色体数减半； 生长发育弱，体形小、各器官明显减小； 雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代 4、诱发植物产生单倍体 ① 种间和属间杂交 远缘杂交中，异种植物虽然不能与母本授粉、受精，由于远缘花粉的诱导作用，卵细胞在没有受精的情况下受刺激而发育成胚 土豆、大麦、小麦、玉米 ② 物理照射和化学诱变 花粉用射线照射后失去了受精能力，然后与母株授粉，卵细胞在花粉的刺激作用下进行孤雌发育，从而产生单倍体 烟草、小麦、金鱼草 第二节 单倍体的应用价值 二、提高选择效率 如果某一性状受一对基因控制 AA×aa→F1→F2中纯合AA个体只有1/4 F1采用花药或花粉培养，产生的后代中AA个体占1/2，比常规杂交育种提高一倍 如属两对基因控制 AAbb×aaBB,F2中要选出AABB个体的机率只有1/16 F1采用花药或花粉培养，AaBb只产生4种花粉：AB、Ab、aB、ab，加倍后AABB个体的频率可达1/4 比常规杂交育种效率提高4倍 常规育种：单倍体育种=1/22n：1/2n。 三、排除杂种优势对后代选择的干扰 对于杂交育种来讲，由于低世代很多基因位点尚处于杂合状态，会有不同程度的杂种优势表现，对个体的选择会造成一定误差 采用DH群体进行选择育种，由于各基因位点在理论上均处于纯合状态，选择到的变异能更大程度上代表真实变异 四、遗传研究的良好实验材料体系  单倍体在作物的数量遗传研究中可能有较大用途，如：基因相互作用的检测、遗传变异的估计、连锁群的检测、影响数量性状的基因数目的估计及多基因的定位等 单倍体可用来创造非整倍体材料，用单倍体与二倍体杂交，可创造一系列的附加系，从而研究染色体的遗传功能 花药和小孢子培养体系还是发育遗传研究的良好材料，可以用来研究细胞的分裂及分化，研究小孢子发育途径的转变，以及与转变有关的基因的表达与调控 五、突变体的筛选 单倍体的每个基因都是单拷贝的，各种隐性基因都可以表现出来，加倍后形成的双单倍体各基因均处于纯合状态，突变体很容易表现出来，大大提高了抗性或其它突变体的筛选效率 对花药进行离子照射，然后对花药愈伤筛选，可以获得理想的突变体 Hamada等（1999）用离子束处理烟草的花药，然后接种土豆病毒Y（PVY），从472株花药再生植株中获得15株抗病毒植株 六、消除致死基因 单倍体带有致死基因的个体即使加倍后形成双单倍体也会由于基因的纯合而被消除 而致死基因在自然群体里常常因为杂合体的存在而不易被彻底消除。 七、选育新型自交系 对双亲或多亲杂交的杂种一代进行花药或花粉培养，获得的双单倍体实际上是纯合的自交系，在杂种优势利用育种中有很大用途 八、遗传转化的受体材料 在转基因育种中，如果用体细胞为受体，经常遇到转基因后代材料分离问题，经多代选择才能稳定下来 如用单倍体细胞作受体，获得的转基因材料经加倍后，从理论上讲会很快达到纯合状态 受体材料可以是小孢子、单倍体原生质体、单倍体胚或单倍体植株作外植体 第三节 培养条件下的小孢子发育 一、小孢子的正常发育 二、培养条件下的小孢子发育 花粉的正常发育途径受到抑制，花粉第二次分裂不再象正常花粉发育那样由生殖核再分裂一次形成两个精子核，而是象胚细胞一样持续分裂增殖 培养条件下花粉的分裂增殖方式有四种类型： 1）营养细胞发育途径 2）生殖细胞发育途径 3）营养细胞和生殖细胞并进发育途径 4）花粉均等分裂途径 三、花药培养 3、影响花药培养的因素 （1）供体植株的生长条件 在烟草中，短光周期（8h）和高光强（16000lux）较有利 大麦，低温（12 ℃ ）和高光强（20000lux）较好 芸苔属的一些种（油菜），高光强和一定的温度变化较有利，对于甘蓝型冬油菜来讲，植株在15 ℃下生长比20 ℃下好 对烟草植株进行氮饥饿处理可以提高花药培养效果 （2）供体植株的年龄 多数情况下幼年植株优于老年植株，可甘蓝型油菜却相反 （3）花粉发育时期 因物种而异，在烟草中，处于第一次有丝分裂期的花粉效果最好 而在禾本科和芸苔属中，单核早期最好 花药在接种以前，一般需先用醋酸洋红压片法进行镜检，以确定花粉的发育时期，并找出花粉发育时期与花蕾或幼穗大小、颜色等特征之间的相应关系 根据花蕾和花药的长度判断小孢子发育时期，从而为取材提供参考 （4）花蕾和花药的预处理 花药预处理： 烟草、茄子 3～5℃ 72小时 水稻 10℃ 10～14天 柑橘 3℃ 5～10天 马铃薯 4℃ 48小时 低温处理