分子生物学第9章 RNA转录后的剪接与加工.pptVIP

第九章RNA转录后的剪接与加工 tRNA和rRNA被加工的证据 rRNA和tRNA有以下三点特性： 1） 所有RNA初级转录产物的5`末端均是5`-三磷酸，而成熟rRNA和tRNA分子的5`末端是5`单磷酸； 2）rRNA和tRNA分子比初级转录产物小很多； 3）所有tRNA含有稀有碱基。 转录后的加工（posttranscriptional modification） Cleavage: endo- and exonuclease cutting (rRNAs, tRNAs, and mRNAs) Polyadenylation: addition of poly A tail to 3? end of mRNA Capping: modification of 5? G in eukaryotic mRNA Splicing: cleavage at internal (intron) sites and ligation of exons to create mature mRNA Covalent modification: bases 几个概念 hnRNA (heterogeneous nuclear RNA)：不均一核RNA 高等真核生物中，如果细胞核基因与其产物间在长度上存在差异，则其初始转录产物称之为hnRNA。 hnRNP:核糖核蛋白颗粒 hnRNA的物理结构是核糖核蛋白颗粒(hnRNP)，颗粒中蛋白质包围着hnRNA，这种hnRNA和蛋白质组成的复合物称为hnRNP。 sRNA (100-300 base, 0-106/cell): 1）snRNA: 细胞核中的小分子RNA称细胞核小RNA (small nuclear RNA) 2）scRNA: 细胞质中小分子RNA称细胞质小RNA (small cytoplasmic RNA)。 3）snoRNA: 在核仁中存在的一类小的RNA，称为核仁小RNA (small nucleolar RNA)。 The rRNAs and Ribosomes rRNAs in Eukaryotes (cytoplasmic) – 5S -18S – 5.8S -28S Packaged with proteins: – 40S ribosome subunit ? 18S + 30 proteins – 60S ribosome subunit ? 5S, 5.8S, 28S + 40 proteins ? 80S Ribosome E. coli 7个rRNA转录单位分散在基因组中；转录单位由16S、23S、5SrRNA以及tRNA基因组成，rrnA~rrnG. 9.2.2 原核生物tRNA的加工 tRNA前体的存在方式： 不同的tRNA串联排列； 多个相同的tRNA串联排列； tRNA与rRNA混合串联排列。 修饰过程： 由RNA核酸内切酶在tRNA分子5`端切断； RNaseP 由RNA核酸内切酶在tRNA分子3`端切断； RNaseF tRNA分子3`端添加-CCAOH； RNaseD 核苷酸的修饰与异构化 9.2.3 原核生物mRNA的加工 9.3 真核生物RNA的转录后加工 剪接加工是RNA分子转录后水平的基因表达调控方式之一。 tRNA、rRNA：切除间隔序列，内含子剪接，5`和3`端的修饰以及碱基的修饰等。 9.3 真核生物RNA的转录后加工 mRNA：非常复杂，需要snRNA 的参与，与蛋白质因子构成核糖核蛋白体(snRNP)。 在剪接过程中形成的剪接复合物称为剪接体,剪接体的主要组成是蛋白质和小分子的核RNA(snRNA)。复合物的沉降系数约为50～60S,它是在剪接过程的各个阶段随着snRNA的加入而形成的。也就是说在完整的pre-mRNA 上形成的一个剪接中间体。剪接体的装配同核糖体的装配相似。依靠RNA-RNA、RNA-蛋白质、蛋白质-蛋白质等三方面的相互作用。比核糖体更复杂，要涉及snRNA的碱基配对， 相互识别等。 9.3.1 剪接方式的分类 内含子的剪接分三类： 1、自我的内含子： I型和II型 2、蛋白质(酶)参与的内含子 主要存在于tRNA中 3、依赖于snRNP的内含子 真核细胞核的蛋白质 9.3.2 tRNA的转录后加工 主要有以下几种加工方式： 切断： “斩头”，形成5′末端；去尾，形成3′-OH末端。 。 剪接。 3’-末端-CCA序列添加：缺-CCA的tRNA要用tRNA核酸转移酶加-CCA 。 化学修饰：通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等进行修饰，如氨基酸臂的4-