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高效液相色谱仪器结构 仪器系统与色谱柱 其工作过程如下： 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。 1 高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由 储液罐 高压输液泵 过滤器 压力脉动阻力器等组成， (1) 输液系统与流动相 A 流动相、脱气及贮液装置 溶剂基本要求：不损害柱的稳定性（液固吸附色谱中的含水溶剂会改变活性，使用键合硅胶固定相时，流动相的pH应在2-8之间）；有足够的纯度（防止柱被污染，提高检测灵敏度）；与检测器匹配（区别流动相与样品，提高检测灵敏度）；对样品有一定的溶解能力（防止样品沉积的柱头上）；制备色谱中要有利于样品的回收（易于蒸发除去，碱性氧化铝柱不用丙酮，避免羟醛缩合） 溶剂过滤 原因： 防止磨损柱塞泵的单向阀和密封圈（影响精度、漏液），防止堵塞管道和不锈钢烧结片。 方法： 通常用直径0.45或0.22um的微孔滤膜过滤，注意不同滤膜对不同溶剂的适用性。 溶剂脱气 原因： 在泵中产生气泡使流速不稳，增加检测器噪音、降低响应以至信号消失。（在出口处由于液体压力减小，溶解的气体以气泡的形式逸出，影响检测器的工作，形成无规律的假峰）。溶解氧可使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消掉；在荧光检测器中会使荧光淬灭，降低灵敏度；在还原型的电化学检测器中，也不能存在氧；另外，还可能使键合相硅胶的键合链断裂。 溶剂脱气方法： 1.氦脱气，氦气在流动相中的溶解度极低，缓慢通过流动相可以赶去溶入的空气，如果使用得当，10分钟内可以除去溶入气体的80-90%，而且连续不断的通入可以防止空气的再溶入和反扩散。通常开始大流速（30ml/min），而后维持4ml/min。 2. 真空脱气。贮液器被抽真空，溶入的气体蒸发形成气泡逸出，效果仅次于氦脱气。可以与抽滤联用，但效果差些。 3. 超声脱气，只能除去30%的气体，用于过饱和溶液效果好些，可与真空脱气联用。 4. 加热回流脱气。最有效的脱气方法，不适于混合流动相。 5. 联机脱气方法。流动相通过有微孔的特制塑料管路，它只允许溶解在溶剂中的气体从管壁中渗出，而流动相只能在管内通过，最终达到在线脱气的目的。 贮液器 一般为500-1000ml的玻璃或石英玻璃瓶。 普通溶剂瓶应不定期废弃。 专用储液器也要定期清洗，以防止污染。 B 高压泵 基本要求： 输出流量稳定(基本无脉冲，精度和重复性优于0.3%)；密封性好 流量可调范围宽（分析型一般0.1-10ml/min）； 输出压力高（最高应达40-50MPa）；压力平稳 死体积小有利于洗脱液更换（一般十几到几十微升）； 耐腐蚀。 常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。HPLC主要使用恒流泵 恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关； 恒流泵，又分注射泵、往复泵和隔膜泵几种，应用最多的是往复泵。 恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，目前主要用于色谱柱装填。 常用高压泵 a. 往复式柱塞泵 b. 柱塞隔膜泵 c. 气动放大泵 往复式柱塞泵 泵原理、结构，单向阀，泵密封垫圈。 串联泵与并联泵 减少脉冲 b. 柱塞隔膜泵 HP1090 C 梯度洗脱装置 改善复杂混合物（宽k’）的分离，缩短分析时间，提高灵敏度。通常流动相洗脱强度由弱到强。不使用通用型检测器（如示差折光检测器）。 要求：混合器容积小、无死区、清洗方便、混合效率高，以提高重现性，减小滞后。 可以分为两种： 高压梯度 低压梯度 D 辅助设备 过滤器 “沉子”和管路过滤器，不锈钢烧结滤器，孔径2-10uL。 脉动阻尼器 减少脉动，内径0.2-0.5mm不锈钢细蛇形管 流动型结构优选（易于清洗、更换流动相），封头型死体积小 压力测量装置 阻尼器出口并联压力传感器（压敏半导体元件）测压， 电表指示压力，过压保护保证泵的安全 2 进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外效应较突出。 进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。 进样方