第19章 基因诊断y.pptVIP

第一节 基因诊断的基本概念 一、分子诊断与基因诊断 二、基因诊断的基本流程 一、分子诊断与基因诊断 针对DNA和/或mRNA的分子诊断，通过分析这些遗传信息分子的序列，从而在分子水平上确定疾病的病因，具高度特异性 基因诊断的内容 检测个体的基因序列的特征 基因突变分析 测定基因的拷贝数 基因表达产物分析 检测是否存在外源基因 基因诊断的基本技术流程 第二节 基因诊断的基本方式和方法 一、对疾病相关遗传标志的连锁分析 二、对疾病致病基因结构异常的直接诊断 连锁遗传标志的类型 限制性片段长度的多态性 （restriction fragment length polymorphism, RFLP ） 指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性类型 单核苷酸多态性 （single nucleotide polymorphism，SNP） 短串联重复序列 ● 在人类基因组中分布广泛，总数大约有5～10万个 ● 个体之间的STR都是互不相同的 ● 能够稳定地遗传 二、对疾病致病基因结构异常的直接诊断 2.点突变的诊断 等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 （allele specific oligonucleotide，ASO） PCR-RFLP PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) 序列分析 3. STR序列的诊断 可用PCR直接扩增技术来诊断基于STR的DNA片段长度多态性 第三节 基因诊断的应用 一、辅助遗传病的临床诊断 二、疾病易感性及患病风险预测 三、疗效评价及用药指导 四、其他应用 一、辅助遗传病的临床诊断 我国前能开展的基因诊断 单基因遗传病的基因诊断 以淘汰重型患儿为目的的产前诊断 二、疾病易感性及患病风险预测 指对配子或移入宫腔之前的胚胎进行快速的遗传学分析，筛选出健康配子或胚胎，以避免异常妊娠的一项技术 遗传筛查 指针对特定人群的系统检查，以期获得被检测群体中的个体是否拥有某一特定疾病的基因型，从而为被检对象或其子女提供疾病易感性、患病风险的相关信息 2.其他疾病易感性预测性诊断 在一些有明显遗传倾向的肿瘤中，这二类基因的突变与肿瘤发生有密切关系 例： 视网膜母细胞瘤与RB基因 Li-Fraumeni综合征与p53基因 乳腺癌与BRCA-1基因 对这些基因的突变分析对于疾病诊断和预测肿瘤发生风险有一定的参考价值 三、疗效评价及用药指导 遗传诊断可应用于临床药物疗效的评价及提供指导用药的信息 四、其他应用 DNA指纹具有以下特点： ① 高度的特异性，只有同卵双生者才会有完全相同的DNA指纹； ② 稳定的遗传性，产生新带的概率仅为0.001~0.004%； ③ 体细胞稳定性，即同一个体中不同组织、细胞、毛发和精液 等产生的DNA指纹完全相同。 显然，DNA指纹可作为法医学鉴定的有力依据。 亲子鉴定：应能从父母的DNA指纹图谱中找到相应条带。 法医物证鉴定：需对现场检材（如毛发、精斑、血迹、唾液等）与嫌疑对象的DNA指纹进行对比。若条带数量、位置和强度完 一致，即可视为同一个体。若稍有差异，则要计算同一性认定的 可信度。 法医学个体认定 DNA指纹技术建于1985年 英国的遗传学家Jeffreys采用小卫星(20-70bp的寡核苷酸串联重复序列)作探针进行人基因组DNA的Southern blot分析，在一个家系中获得了一张具有高度多态性的DNA图谱，图谱的每一个成员都有各自独特的DNA电泳谱带。 2.病原体的基因诊断 基因诊断知识点一览图 PCR A T C G Wild Amplify region of interest Denature samples in Formamide and Heat A T C G Mutant DNA molecules conformation depends on their sequence Run on a Non-denaturing gel and look for mobility differences T A G C DNA序列测定 DNA序列测定是诊断基因突变最直接可靠的方法。 STR:短串联重复序列 PCR技术直接诊断STR突变 1.遗传病患病风险分析 2.其他疾病易感性预测性诊断 1.遗传病