平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作.pptVIP

专题2 :微生物的培养与应用 一、倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用 什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不 烫手时即可开始倒平板。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污 染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝 固后的培养基表面的湿度也比较高，将平 板倒置，既可以使培养基表面的水分更好 地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培 养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基 溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还 能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个 平板培养微生物。 二、纯化大肠杆菌 微生物接种方法常见的有平板划线法 和稀释涂布平板法。 （一）平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连 续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分 散到培养基的表面。 在数次划线后可以分离到由一个细胞 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。 1.为什么在操作的第一步以及划线之前都要 灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环？ 第一步灼烧接种环是为了避免接种环 上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束 后，接种环上残留的菌种。划线结束后仍 然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残 留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作 者。 平板划线法的讨论 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后 再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况 平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况 二.稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。 系列稀释操作 101 102 103 104 105 106 (1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管 中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。 (3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。 涂布平板操作 (1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。 (2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。 (3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷 却8～10s。 (4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。 涂布平板操作讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到370C的恒温箱中，培养12～24h后进行观察并记录结果。 稀释涂布平板法获取的菌落 * * * *