生物化学 第一章.核酸化学.pptVIP

（a） （b） （c） （d） （e） 基因组DNA DNA限制片段 硝酸纤维素滤膜 同探针同源杂交的基因DNA片段 X光底片 Southern Blotting 二　DNA的体外扩增 　　　　聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction, PCR) 所需条件： DNA　模板 dNTPs 引物 （Primer） DNA聚合酶 反应体系（buffer with Mg2+ ） 过程：变性　退火　延伸　变性　退火　延伸 ………. 三　DNA的测序 双脱氧DNA链合成终止法 原理: DNA的合成过程中，在新合成的DNA链的3? 末端，依据碱基配对的原则，通过生成新的3?，5?-磷酸二酯键，逐一接入相应的核苷酸。如果DNA合成反应只使用一种引物，那么新合成的任何DNA链的起点都一样。如果接入的核苷酸不是一般的脱氧核苷酸，而是2?，3?-双脱氧核苷酸时，由于该核苷酸的3? 碳位不含羟基，不能够再生成新的3?，5?-磷酸二酯键，使DNA链合成终止，产生短的DNA链。 Fig. DNA sequencing by Sanger (dideoxy) method 作业 名词： 生物化学；　核酸的变性与复性；　增色效应与减色效应；Tm 符号解释： DNA；RNA；m5C; Am; DHU; ?; ATP; dNTP; cAMP; poly A 写结构式：ATP； cAMP; DHU；U 简述DNA，RNA的分布，结构、组成和功能的异同。 理解碱基、核苷、核苷酸和核酸在分子结构上的关系 三种RNA的含量、种类及功能的区别 DNA的双螺旋结构的特点 维持DNA双螺旋结构稳定的主要因素 核酸的主要理化性质及其应用 * * B型为正常型，常见。 当DNA脱水时则变为A型，另外DNA／RNA的杂交分子也可能是A型。 Z型为细长松散，部分左手螺旋，多见富含甲基化的DNA区域，为DNA的不表达区。调控DNA的表达。 * 存在的意义？ 三　DNA的高级结构 1.DNA的超螺旋结构 (superhelix 或supercoil) DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构。 负超螺旋(negative supercoil) 盘绕方向与DNA双螺旋方向相反, 即左手超螺旋(常见). 正超螺旋(positive supercoil) 盘绕方向与DNA双螺旋方同相同,即右手超螺旋(目前仅嗜热菌体内存在). 意义 DNA超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化及其调控对于DNA复制和RNA转录过程具有关键作用。 DNA 的超级 结构与染色体 的组装 四 RNA的结构与功能 RNA的组成和结构特点： 核糖核苷酸按一定顺序相连（3’，5’-磷酸二酯键） 基本组成单位：AMP、GMP、CMP、UMP 主要为单链 （一）、mRNA的结构与功能： 真核生物中： 1、5’帽：m7GpppNmP 2、3’尾：polyA尾巴 3、编码区、非编码区 m7Gppp- AAAA…..A 5’ 3’ 5’非编码区 3’非编码区 编码区 功能：合成蛋白质的模板 结构特点： m7Gppp AAAAAAAA DNA hnRNA mRNA AUG UAG UAA UGA 5 ? UTR UnTranslation Region 3 ? UTR 外显子 内含子 （二）tRNA的结构与功能： 功能：转运氨基酸至蛋白质合成场所 结构特点： 1、由70－90个核苷酸组成; 2、含10~20%的稀有碱基（DHU，假尿嘧啶，mG，mA）； 3、二级结构为三叶草形； 4、含有四个臂和四个环； 5、3’端为CCA-OH结构，为接受AA的部位； 6、反密码子环含有反密码子； 7、三级结构为倒L型。 （三）、rRNA的结构与功能： 21种 原核 真核 小亚基 rRNA 蛋白质 rRNA 蛋白质 大亚基 16 S 18 S 33种 5S，23S 5S，5.8S ， 28S 49种 34种 大 小 30 S 40 S 大 小 50 S 60 S 核蛋白体 大 小 70 S 80 S rRNA+蛋白质 核糖体 核糖体的组成 （蛋白质合成的场所） 沉降系数（S）： 单位离心力场中沉降分子下沉的速度，常用来描述生物分子的大小。 五、基因与基因组（自学） 基因的概念、基因组计划及其研究进展 第三节 核酸的理化性质 一、两性电解质 二、高分子性质 三、UV吸收 260nm 四、变性、复性与杂交 一、两性电解质 两性电解质\但酸性强 电泳行为---向正极移动（pH7-8），移动速率与分子大小、凝胶浓度、电流强度有关。 沉淀行为--- （1）加盐（中和电荷？） 0.3M NaAC ； （2）乙醇纯化 总RNA电泳图 DNA电泳图 二、