第二节 DNA的结构Structure of DNA.ppt

戊糖 核糖 核酸的元素组成 1、 DNA双螺旋模型的提出 a.研究背景： 1950年，Chargaff从大量的不同来源的DNA样品的分析中发现了DNA组成的当量规律，即A＝T，G＝C，A＋G＝C＋T。 不同生物种属的DNA碱基组成不同， 同一个体不同器官、不同组织的DNA具有相同的碱基组成。 理论化学家L. Pauling运用化学的简单定律来推理，研究了蛋白质?-螺旋结构，此方法启发了Watson和 Crick。 M. Wilkins、R. Franklin等在DNA的X－射线晶体结构方面作出了重大的贡献。 b. DNA双螺旋结构模型的提出： 对于遗传上有重要功能的蛋白质识别DNA双螺旋结构上的特定信息是非常重要的。 2 维持DNA双螺旋的力 1 ）氢键 GC之间有三条氢键，AT之间有两条氢键，这是DNA双螺旋结构的重要特征之一，DNA的许多物理性质如变性、复性以及Tm值等都与此有关。 范德华力：存在于分子间的一种吸引力； DNA双链中嘌呤和嘧啶的范环德华的半径是0.17nm左右 ，其累积的范德华力是相当可观的，这样范德华力加强了疏水作用，这是形成碱基堆集力的另一个重要因素。 A，B，Z型双螺旋的特性 Z-DNA有什么生物学意义呢? Z-DNA在热力学上是不利的。带负电荷的磷酸根距离太近，产生静电排斥。 DNA链的局部不稳定区的存在就成为潜在的解链位点。 DNA解链是DNA复制和转录等过程中必要的环节，因此Z-DNA的结构与基因表达调控有关。 超螺旋(superhelix or supercoil)的发现 1965年电镜发现SV40和多瘤病毒的环形DNA的超螺旋 第二节 DNA的结构 1 核酸的化学组成 2 DNA 的一级结构 3 DNA 的二级结构 4 DNA的三级结构 5 DNA物理结构的不均一性 6 DNA的理化性质---变性和复性1 变性(denaturation) 3） 核酸变性程度的鉴定－紫外测定法： 原理： 嘌呤碱、嘧啶碱存在共轭双键，碱基、核苷、核苷酸、核酸在240-290nm处有强烈的紫外吸收，最大吸收峰在260nm处。 紫外光吸收值： 1 双链DNA A260=1.00 2 单链DNA A260=1.37 3 自由碱基 A260=1.60 5） 影响DNA Tm值大小的因素： DNA的均一性： G-C含量： Tm值计算公式：Tm＝69.3+0.41 (G+C)% GC%=（Tm-69.3）×2.44 介质中的离子强度： DNA保存在1mol/LNaCl中。 2 复性 1） DNA复性(renaturation) 变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象，又称为退火（annealing）。 2） 复性的影响因子： 温度和时间：低于Tm值 25℃左右 (60-65℃) DNA浓度： DNA片段的大小： DNA顺序的复杂性； 反应溶液中的离子强度。 3 杂交（hybridization） 杂交：亲缘关系很近的不同来源的DNA单链或RNA单链与DNA单链之间通过碱基互补形成杂交分子的过程。 三、DNA的高级结构---超螺旋（superhelix) 1）定义：指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。是一种比双螺旋更高层次的空间构象。 线状DNA形成的超螺旋 环状DNA形成的超螺旋 超螺旋是所有线性或环形DNA的共有的重要特征。 拓扑异构酶 拓扑异构酶 or溴化乙锭 DNA扭曲与双螺 旋相同（拧紧） DNA扭曲与双螺旋相反（松开） 负超螺旋 松弛DNA 正超螺旋 负超螺旋（Negative Supercoiled ） 正超螺旋（positive supercoiled ） 导致右手超螺旋 导致左手超螺旋 超螺旋的类型 超螺旋的形成总是要向着抵消初级螺旋改变的方向发展 超螺旋使环型DNA变的更为致密 沉降常数和电泳迁移率并不完全一致 White方程： L=T+W 2、超螺旋的定量描叙 L（Linking nnmber）： 链环数或称拓扑环绕数，指cccDNA中一条链绕另一条链的总次数。 其特点是 (1)L是整数； (2)在cccDNA中任何拓扑学状态中其值保持不变； (3)不发生链断裂时，L为定值 W：扭曲数，即超数旋数。 直观上为双螺旋在空间的转动数 其特点是： (1)可以是非整数； (2)是变量； (3)右手螺旋时，W取负值。 T：缠绕数，即双螺旋的圈数。初