泛素调节的蛋白质降解（10.17）.pptVIP

* Content Layouts * Content Layouts * Content Layouts * Content Layouts 泛素调节的蛋白质降解 报告人：谭旭 2011201169 王艳梅 2011201166 内容简介 前言 泛素的发现过程 泛素化系统 泛素--蛋白酶体降解途径 4 1 2 3 1.前言 蛋白质是生命活动的基本功能分子。在细胞内，蛋白质处于合成(诞生)与降解(死亡)的动态平衡。迄今，至少有5次诺贝尔奖授予研究蛋白质如何“诞生” 的科学家，而2004年的诺贝尔化学奖表彰了蛋白质“死亡” 方面的研究成果。 细胞给需要清除的蛋白质挂上“死亡标签” (多聚泛素链)，在一系列酶作用下，该蛋白质被降解。泛素介导的蛋白酶体系统与蛋白质质量控制、细胞周期、DNA修复、转录以及免疫应激等密切相关，也与许多种疾病的发生相关。 2004年诺贝尔奖 2.泛素的发现过程 先驱研究1 Contents Contents 1953年，Simpson 利用当时普及的放射性同位素进行代谢实验，发表了“生物细胞中的蛋白质分解中需要代谢能量即需要ATP的加水分解”的论文。但是，这个划时代的研究，在以后的很长一段时间里，被人忽视了。在当时热力学的世界观中，加水分解反应是产能反应，与需要能量的合成反应不同，这个过程是不需要能量的。 2.泛素的发现过程 先驱研究2 Contents Contents 1960年代前期，发现了充满了加水分解酶的细胞器--溶酶体，因此其被认为蛋白分解的主要器官。为了保持溶酶体和细胞器内的酸性pH值，需要代谢能量，这些能量是来自膜型的ATP泵（ATPase）的作用。所以早期研究认为蛋白质在细胞内是被溶酶体降解的，在降解的过程中并没有能量的消耗。 2.泛素的发现过程 先驱研究3 Contents Contents 1977年Goldberg等在试管内再现Simpson所观察到的现象。这篇论文唤醒在图书馆底沉睡的Simpson的发现。Goldberg等报道网织红细胞的提取液中加入ATP显著促进了蛋白质的分解，也就是伴随着蛋白分解有能量的消耗。这种能量的消耗与前面所述的机制是完全不同的。 网织红细胞向红细胞最终分化时候，不再需要的细胞内的蛋白质在细胞内会快速分解 2.泛素的发现过程 先驱研究4 Contents Contents 同时在70年代，随着溶酶体机能抑制剂的开发，经过这些试剂处理过的细胞仍然有恒定的蛋白质分解难以抑制，表明了存在与溶酶体不同的蛋白分解系统。接着，在大肠杆菌这样的不含细胞器的原核生物内发现了ATP依赖性的蛋白水解酶的Lon酶。Goldberg等人从Lon酶的经验出发，坚信真核细胞中也存在ATP依赖性的蛋白水解酶。 时间：1978年 地点：以色列 人物： 博士生Hershko 硕士生Ciechanover 2.泛素的发现过程 课题：化学方法分离，纯化网织红细胞提取液中的阶段性的相关因子 遇到的问题：提取物中有大量的血红蛋白难以观察 DEAE-纤维素柱 洗脱组分 （无蛋白酶解活性） 结合 更不同寻常的是，未被吸附组分I经过长时间高温加热处理(96℃ ，60 min)后，这种互补活性仍旧基本保留完好。 采用I125标记的APF-1以检测其相互作用的分子。意外地发现在ATP存在的条件下，APF-1可以共价结合到许多蛋白质分子上，而且这种共价连接键并非二硫键。 在组分2中分离纯化出泛素活化酶(E1)， 该酶与泛素之间形成高能硫酯键 。同时发展了共价亲和层析柱方法，此方法对于E2、E3酶的纯化至关重要。 同时发现125I -APF-1是以高分子梯状出现的，而且明确了这个修饰反应在ATP加水分解反应中是必要的。 1978年 在组分1中成功提纯ATP-dependent proteolysis factor(APF-1)。APF-1是热稳定性很好的小分子蛋白。当时推想，APF-1是组分2内存在的尚未认定的蛋白水解酶的活化因子 1980年 1980年 1981年 泛素 多聚泛素 3.泛素化系统 泛素是一种热稳定蛋白，含有76个氨基酸，相对分子质量为8.6 kDa(pI=6.7)，因广泛分布于各种真核细胞和组织中而得名。 泛素氨基酸序列相当保守，例如酵母的泛素序列与人类相比只有3个氨基酸的差别。x线衍射分析泛素是一个紧密的球形结构，包括4个B片层和1个仪螺旋，共形成3个半转角。 泛素化(ubiquitylation)是指一个或多个泛素分子在一系列酶的作用下与其他蛋白质分子共价结合。带有多聚泛素的蛋白质通常被含有多种蛋白酶的蛋白体(proteasome)所识别和降解。 泛素活化酶El：通过半胱氨酸残基与泛素c端活化的甘氨酸残基形成硫酯键 ，El-泛素中间体中的