容器密封性试验.doc

容器/密封系统完好性试验---微生物侵入试验方案 ---大容量注射剂产品 验证编号： 起草人： 部门审核： QA审核: 审核批准人： 批准日期： 1 概述 微生物侵入试验是对最终灭菌容器／密封件系统完好性的挑战性试验。在验证试验中，取输液瓶，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。 2 试验样品的制备 2.1 在玻瓶输液及软袋输液生产线上，按100ml、250ml二种产品规格，各取300瓶（袋）数量的瓶（袋）中，灌装营养肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。 2.2 将灌装后的容器经121℃、20分钟灭菌（过度杀灭法灭菌）。 2.3 从灭菌柜中取出试样， 冷却， 将每一试样倒转， 使培养基与容器内表面充分接触，在30～35℃下竖放培养14天。 3 确认培养基促菌生长能力——营养性试验 3.1 所有试样培养 14 天均不长菌时，随机取 20 个带盖试样，每个试样内接种 1ml 的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，菌液浓度：10～100CFU/1ml。 3.2 在30～35℃下培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。 3.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。 使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。 4 挑战菌悬浮液的制备 4.1 从铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC 9027 的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含lOml 无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养16～18h。 4.2 将每管的培养物分别转入含 1000ml 相同培养基的容器内，于 30～35℃下培养22～24h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。 4.3 培养结束后的菌悬液即可用来作容器／密封系统完好性试验。 5 微生物侵入试验操作步骤： 本试验须在生物安全柜内或其他不影响生产环境的地方进行。 5.1 将新鲜的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027 的菌悬液倒入合适的盆中，用金属丝架固定试样容器，使试倒置在菌悬液中。 5.2 将50个经最长灭菌程序灭菌的试样倒置，并浸入菌悬液中。试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中。 5.3 实验开始时取一份菌悬液，平板计数每毫升所含的活菌数。按 3.3确认试验用微生物是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。 5.4 将试样容器在菌悬液中持续浸泡约4h。 5.5 浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。 5.6 从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含 0.5％过氧乙酸的 70％异丙醇消毒容器外表面。 5.7 取装满培养基的样品两个，作阳性对照。阳性对照用样品制备方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表用含 0.5％过氧乙酸的70％异丙醇消毒。此后，接种入 10～I00CFU铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027， 按步骤3进行培养基的营养试验。 5.8 将消毒后的容器，置 30～35℃培养 7 天。 5.9 挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。 5.10 将挑战试验用的试样培养7天，观察检查试样容器内培养基中微生物的生长情况。 5.10.1 对每一试样进行观察检查，有生长记作+，无生长计作－。 5.10.2 如果试样容器长菌，按3.3方法确认生长菌是挑战微生物——铜绿假单胞菌。 5.10.3 如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液的试样取 10 个，分别按步骤3进行培养基的营养检查。 6 结果评价 6.1 步骤3、步骤5.8、步骤5.11.3中进行的营养试验都合格，试样的挑战试验才有效。 6.2 在挑战试验开始时，挑战用菌悬液浓度(活菌数)必须达到1×106CFU/ml。 6．3 挑战试验中试样如有长菌，需记录长菌的试样数。在试样中如出现长菌试验，则需按下述要求作进一步调查。 6．3．1 仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。 6．3．2 将观察到试样容器封口的缺陷，采用拍照或及其他适当详细记录。 6．4 如果任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器封口明显