bpa暴露导致f2代胰岛素抵抗的效应及其表观遗传机制分析word格式论文.docxVIP

中英文缩略词表（List of Abbreviation）英文缩写英文全称中文全称ANOVAOne way analysis of variance单因素方差分析AUCArea under curve曲线下面积BPABisphenol A双酚 ABSPBisulfite sequencing PCR亚硫酸氢钠测序 PCR CpGCytosine – phosphate - guanine胞嘧啶-磷酸酯键-鸟嘌呤 DESdiethylstibestrol己烯雌酚DEHPDi- (2-ethylhexyl) phthalate邻苯二甲酸(2-乙基己基酯)DBPDibutyl phthalate邻苯二甲酸二丁酯GckGlucokinase葡萄糖激酶ipGTTintraperitoneal glucose tolerance tests腹腔葡萄糖耐量试验 ipITTintraperitoneal insulin tolerance tests腹腔胰岛素耐量试验 EDCsEndocrine disrupting chemicals环境内分泌干扰化学物 IRS-2insulin receptor substrate-2胰岛素受体底物 2 NR4A1nuclear receptor subfamily 4 A1核受体亚家族 4 A1 NR4A3nuclear receptor subfamily 4 A3核受体亚家族 4 A3SREBP-1cSterol regulatory element binding protein-1转录因子固醇调节结合蛋白 1cPCRPolymerase chain reaction聚合酶链式反应HOMA-IRHomeostasismodelassessment-insulin resistance胰岛素抵抗指数RRBSReduced Representation Bisulfite Sequencing简化表观亚硫酸氢盐测序SPFSpecific-pathogen free无特异病原体PGCprimordial germ cell原始生殖细胞1BPA 暴露导致 F2 代胰岛素抵抗的效应及其表观遗传机制研究博士研究生:李耿奇导师:徐顺清教授中文摘要在机体早期发育的过程中暴露于双酚 A 可导致机体发育关键器官和组织发 生表观遗传特征的改变，并导致成年阶段的能量代谢稳态的破坏，产生胰岛素抵 抗、糖耐量受损等 2 型糖尿病特征。如果 F0 代的母体在怀孕和哺乳阶段受到了 双酚 A 的直接暴露，则其 F1 代的原始生殖细胞同样处于 BPA 的直接暴露之下， 并由此导致 F1 代生殖细胞表观遗传信息的改变，这种改变可以通过生殖细胞再 传递给 F2 代个体。双酚 A 可以通过改变原始生殖细胞的表观遗传信息，从而导 致隔代的毒理效应，这种推理存在理论上的可能。因此，F0 代母体在围产期暴 露于双酚 A 是否会使得 F2 代个体与 F1 代一样，产生能量代谢紊乱的症状，是 一个不可回避的问题。在本研究中，F0 代 SD 大鼠在怀孕和哺乳期间通过灌胃的 方式每天给予 40μg /kg/day 的 BPA 暴露，而随后的与 F1 代雄鼠交配的雌鼠和 F2 代大鼠均不再受到 BPA 的直接暴露。 我们通过葡糖糖耐量实验（ipGTT）和胰 岛素耐量（ipITT）实验，以及瘦素脂联素等血生化指标来反映 F2 代的葡萄糖稳 态和胰岛素抵抗水平，并通过发现胰岛素通路关键基因的表达改变来进一步证实 胰岛素抵抗和糖耐量损伤的状态。同时，我们继续在 F2 代的肝脏和 F1 代的生殖 细胞中寻找可能的表观遗传靶点。 我们的研究结果发现，相对于对照组双酚 A 暴露组的 F2 代大鼠，其葡萄糖耐量谁和胰岛素耐量水平均出现了明显下降，同 时肝脏葡萄糖激酶（GCK）的基因相对表达水平也显著下调。甲基化测序结果显 示，GCK 启动子区域的 12 个甲基化位点在 BPA 暴露组的 F2 代肝脏组织为全部 为甲基化的状态，而在对照组 F2 代大鼠中则有 5 个位点为非甲基化的状态。在 F1 的精子中，仅 CpG 位点-314 中在 BPA 暴露组和对照组之间呈现不同的甲基化 状态。而无论是 F2 代肝脏还是 F1 代雄性大鼠的精子，BPA 暴露组均出现了明2显地全基因组低甲基化现象。同时，BPA 暴露所导致的 F2 代胰岛素抵抗和糖耐量异常，F2 代肝脏 Gck 基因甲基化模式的改变，以及 F1 代精子 Gck 基因甲基 化模式的改变，与 F1 代能量代谢紊乱症状和 F1 代神经行为发育异常之间没有显 著地相关性。提示 F2 代所产生的现象时由 F0 代母鼠围产期暴露于 BPA 所直接 导致的。本研究的结论是，F0 代妊娠和哺乳期 BPA 暴露可引起 F2 代的