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3miR-33b 靶向 c-Myc 基因抑制胃癌细胞的迁移，侵袭和增殖 304胃癌细胞系中 miR-33b 的表达受甲基化调控 325miR-33b 上游启动子区 CpG 岛甲基化程度检测 336胃癌病例中 CpG 岛 1 的 QMSP 检测 36讨论 37结论 40参考文献 41文 献 综 述 45个 人 简 介 55致谢 56DNA 甲基化介导的 microRNA-33b 下调及其在胃癌中的作用 中文摘要目的: 探讨 miR-33b 基因上游 CpG 岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情 况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法: 使用 Taqman real-time PCR 法检测 miR-33b 在 105 例胃癌病人癌及 癌旁组织中的相对表达情况，并分析 miR-33b 表达水平与胃癌临床病理特征间 的关系，随后于 HGC-27 及 MGC-803 胃癌细胞系过表达 miR-33b，行细胞增殖、 迁移、侵袭及集落形成实验，验证 miR-33b 对胃癌细胞系功能的影响。Western 实验进行 miR-33b 靶基因 c-Myc 的检测。最后使用组织基因组 DNA 快速提取试 剂盒提取胃癌组织及正常人血液基因组 DNA，经重亚硫酸氢盐处理后，甲基化 特异性 PCR 法检测其上游 CpG 岛的甲基化程度，PCR 产物经琼脂糖凝胶检测， 并进行统计分析。结果: miR-33b 表达下调与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无脉管 转移、肿瘤分型无相关性，但与肿瘤是否发生远处转移具有相关性（p0.05）， 且其低表达与上游 CpG 岛的甲基化沉默修饰密切相关（p0.05）。结论: miR-33b 的表达在胃癌中受甲基化调控且与胃癌远处转移相关。关键词：miR-33b；胃癌；甲基化MiR-33b down-regulation by DNA Methylation and its implications for gastric cancerAbstractObjective: To investigate the implications of miR-33b down-regulation by DNA Methylation in gastric cancer （GC） and the association between miR-33b level and various clinicopathological factors.Methods: Expression of miR-33b was detected by Taqman real-time PCR in 42 paired GC samples. The association between miR-33b level and various clinicopathological factors was analyzed. Genomic DNA samples were amplificated by PCR after modified by sodium bisulfite using the EpiTect Bisulfite Kit then the methylation degree of CpG island upstream of miR-33b gene was detected bymethylation specific PCR （MSP）.Results: The lower level expression of miR-33b was not associated with gender, age, venous invasion, position, borrmann typing, pT stage, pN stage, but significantlyassociated with gastric cancer metastasis （p0.05） and regulated by CpG islandhypermethylation （p0.05）.Conclusion: miR-33b may be regulated by DNA methylation and act as a tumor suppressor in gastric cancer.【Key words】miR-33b; gastric cancer; methylation英文缩写一览表英文缩写GC英文全称Gastric cancer中文全称胃癌HGC-27 MGC-803 ECM DMSO SDS EDTA PBSTris DMEM IMDM FBSDEPCundifferentiated gast