dna损伤应答中p38α的作用机制及乳腺癌干细胞与tregs的相互作用研究word格式论文.docx

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南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外,本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名:年月日非公开学位论文标注说明(本页表中填写内容须打印)根据南开大学有关规定,非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文,公开学位论文本 说明为空白。论文题目申请密级□限制(≤2 年)□秘密(≤10 年)□机密(≤20 年)保密期限20年月日至 20年月日审批表编号批准日期20年月日南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效)注:限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年)中文摘要 第一部分背景:化疗和放疗可以引起快速增殖的肿瘤细胞发生 DNA 损伤,DNA 损伤可 以通过激活 p53 信号通路来激发细胞周期停滞或细胞凋亡。激活的 p53 信号通 路通过转录调控 p21WAF1 的表达来引起可逆的细胞周期停滞,这样为 DNA 损伤 修复和细胞再次利用完整的 DNA 进入细胞周期提供了时间[1, 2]。如果不能修复 损伤的 DNA,细胞会发生凋亡,而这一过程也是由 p53 信号通路调控的。通过 翻译后修饰,p53 通过诱导 PUMA 的表达来促进细胞凋亡[3, 4]。p53 通过调控不同的目的基因的表达来决定细胞的命运,而 p53 的转录活性 是由不同的翻译后修饰来决定的[5]。细胞发生 DNA 损伤后,p53 既可以被磷酸 化,也可以被乙酰化[6-8]。p53 可以被组蛋白乙酰转移酶 CBP/p300 乙酰化其 K320[7, 9]、K164[10]或 C 端结构域的 K370、372、373 和 K382[8]等位点,这样可以阻断 Mdm2 和 Mdmx 与 p53 的结合,从而抑制 p53 的降解并促进 p53 与其目的基因 的启动子结合。另外,组蛋白乙酰转移酶 hMOF 和 Tip60 可以乙酰化 p53 的 K120 位点,并激活其促凋亡活性而非其调节细胞周期停滞的活性[11]。Tip60 是组蛋白乙酰转移酶(HATs)MYST 家族的成员,参与多种细胞功能 的调节[12, 13]。Tip60 作为共转录调节因子与目的基因的启动子结合,通过乙酰化 组蛋白来促进目的基因的表达。另外,Tip60 可以通过直接相互作用并乙酰化修 饰非组蛋白来调节其活性或表达水平[11-13]。有研究表明,Tip60 参与细胞的凋亡 [14, 15]、DNA 损伤的应答[16]以及原癌基因诱导的衰老[17],同时,Tip60 还是一个 潜在的抑癌基因[18]。DNA 损伤发生后,Tip60 可以通过乙酰化 p53 的 K120 位点,并促进细胞发 生凋亡;在 Ras 原癌基因诱导的细胞衰老中,p38 磷酸化 Tip60 的 T158 位点, 并激活 Tip60 的乙酰转移酶活性。因此,我们的研究旨在明确是否 p38 介导的 Tip60 磷酸化可以使 Tip60 在 DNA 损伤诱导凋亡等其他生物学功能中起作用。 结果:我们发现 DNA 发生损伤后,可以导致 p38 磷酸化并激活其激酶活性,磷 酸化 Tip60 的 T158 位点,从而导致 p53K120 乙酰化;而且 p38α 和 Tip60 对 p53K120 的乙酰化、p53 与 PUMA 启动子的结合、PUMA 表达的诱导以及细胞 的凋亡都是必要的,当通过 RNAi 下调 p38α 和 Tip60 的表达或通过小分子抑制I剂抑制 p38α 的活性都会使 p53-K120 位点的乙酰化程度、p53 与 PUMA 启动子的结合效率、PUMA 的表达水平以及凋亡细胞的比例降低;另外,通过直接过 表达持续激活的 p38α 上游基因 MKK3 和 MKK6 就可以导致 Tip60T158 的磷酸 化水平、p53K120 的乙酰化水平以及 PUMA 的表达水平增加,从而引起细胞凋 亡;但是把 Tip60 的 T158 位点突变为 A158 后,Tip60 不能被 p38α 磷酸化,从 而不能引起其下游 p53K120 的乙酰化、不能诱导 PUMA 表达和细胞凋亡。 结论:DNA 损伤应答的过程中,p38 在激活 Tip60 的乙酰转移酶活性中起了重 要作用,并且对 Tip60 下游通路 p53/PUMA 的诱导表达及其引起的细胞凋亡至 关重要;同时提示了 p38 和 Tip60 抑制肿瘤的机制。 关键词:p38、Tip60、PUMA、凋亡

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