dsrna上调numb基因表达对人前列腺癌pc3细胞影响的研究word格式论文.docx

目录附录……………………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………2 英文摘要………………………………………………………………4 前言……………………………………………………………………7 材料和方法…………………………………...……………………….9 1. 细胞系和主要试剂91.1细胞系91.2主要试剂91.3不同浓度的 DHT 培养液配制 101.4不同浓度的氟他胺培养液配制112. 主要仪器和设备113. dsRNA 的设计与合成 124.细胞的培养与转染124.1细胞复苏124.2细胞培养及传代124.3细胞冻存134.4细胞转染13.实时定量逆转录—聚合酶链反应（RT-qPCR）145.1RNA 提取145.2逆转录155.3实时定量 PCR.15.蛋白印迹（Western Blot）166.1细胞总蛋白的提取166.2定量蛋白166.3Western Blot17MTT 法检测细胞增值率17Annexin V/PI 双染法189.统计学分析19实验分组……………………………………19结果…………………………..………………………………………20 1. dsRNA 的设计 202. dsRNA 对去势抵抗性前列腺癌 PC-3 细胞靶基因 Numb mRNA水平的影响 213. dsRNA 对雄激素抵抗性前列腺癌 PC-3 细胞靶基因 Numb 蛋 白水平的影响 224. Numb-saRNA 转染后对细胞增殖能力的影响235. Numb-saRNA 转染后对细胞凋亡的影响25讨论……………………………………………..……………………27 结论………………………………………………..…………………31 参考文献……………………………………………..………………32 综述……………………………………….………….……………35 致谢………………………………………………..…………………55附录Androgenic Dependent Prostate Cancer , ADPC 激素依赖性前列腺癌 Androgen Deprivation Therapy, ADT 雄激素剥夺治疗 Androgen Receptor, AR 雄激素受体Castration Resistant Prostate Cancer, CRPC 去势抵抗性前列腺癌Dihydrotestosterone, DHT 二氢睾酮Dimethyl sulfoxide, DMSO 二甲基亚砜Double-stranded RNA，dsRNA 双链 RNA DsControl 对照组 dsRNAFetal Bovine Serum, FBS 胎牛血清Flutamide 氟他胺MethylThiazolytetrazolium, MTT 四甲基唑蓝Optical density, OD 光密度值Phosphate Buffer solution, PBS 磷酸盐缓冲液Prodium Iodide, PI 碘化丙啶Prostatecancer, Pca前列腺癌Prostatespecific antigen，PSA 前列腺特异性抗原 Real-time quantitative PCR，RT-qPCR实时定量逆转录—聚合酶链反应 RNA activating， RNAa RNA 激活Small activating RNA，saRNA 小激活 RNAdsRNA 上调 Numb 基因表达对人前列腺癌 PC-3 细胞影响的研究中文摘要目的基于小激活 RNA（small activating RNA，saRNA）的肿瘤治疗策略，为 Numb 基因筛选出具有激活功能并相对高效的 saRNA 分子。继而探讨雄激素及抗雄激 素药物对转染 Numb-saRNA 的人前列腺癌 PC-3 细胞生长的影响。方法设计与合成针对 Numb 基因的 3 对候选小分子双链 RNA（double-stranded RNA，dsRNA）分子，对照组 dsRNA（dsControl）设计成与人类基因组序列非 同源。将 dsRNA 分子转染人前列腺癌 PC-3 细胞。采用 Real-time quantitative PCR(RT-qPCR)法检测转染后人前列腺癌 PC-3 细胞中靶基因 Numb 的 mRNA 表达水平。3. Western Blot 验证转染后人前列腺癌 PC-3 细胞靶基因 Numb 的蛋白表达水 平。4. 将筛选出的 Numb-saRNA 转染入人前列腺癌 PC-3 细胞，实验组分为转染组 和非转染组，以未转染以及未行药物处理的细胞作为阴性对照组。分别采用不 同浓度的二氢睾酮(dihydrotestosteron