egr1调节cse诱导的ho1表达及功能研究word格式论文.docx

中文摘要HO-1（heme oxygenase-1, HO-1）是一种诱导型的血红素氧合酶，可催化降 解血红素生成胆绿素（biliverdin），CO 及 Fe2+，其中胆绿素迅速被胆绿素还原酶 还原为胆红素（bilirubin），而铁可诱导铁蛋白并与之结合。HO-1 在正常情况下 低表达；应激状态下，HO-1 的适量表达可减轻细胞损伤。研究发现，健康吸烟 者肺中 HO-1 的表达水平显著高于严重型慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）患者。Egr-1（early response growth gene 1, Egr-1）属于即刻早期反应基因家族一员， 多种信号包括细胞因子、生长因子、胰岛素、电离辐射、脂多糖（LPS）、低氧 等均可诱导 egr-1 基因表达。转录激活的 Egr-1 与其靶基因上特异位点结合，通 过激活或抑制靶基因的表达而参与细胞生长分化、细胞凋亡等相关过程。研究认 为 egr-1 是 COPD 的易感性基因，Egr-1-/-小鼠对香烟烟雾诱导的肺气肿有拮抗作 用。本课题组的前期工作发现，香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract，CSE） 刺激时，Egr-1-/-小鼠的肺成纤维细胞中 HO-1 的表达水平显著降低，提示 Egr-1 可能参与了 CSE 诱导的 HO-1 表达。此外，小鼠 ho-1 基因增强子区 Egr-1 类似 结合序列的发现，提示我们 Egr-1 可能直接调节 HO-1 的表达。另外，针对 COPD 的治疗，目前尚缺乏有效的药物，我们期望可为其药物研发作初步探索。据此，本文进行了以下的研究：首先，我们运用 Western blot 分析了小鼠肺成纤维细胞及小鼠巨噬细胞（RAW264.7）中 HO-1 的表达情况。结果显示，CSE 可诱导细胞中 HO-1 的表 达。说明 HO-1 的确参与了 CSE 刺激细胞的过程。其次，我们应用细胞免疫荧光技术发现，CSE 刺激可诱导 Egr-1 入核。将含 Egr-1 类似结合序列的小鼠 ho-1 基因增强子区插入 pGL-3 载体，构建荧光素酶重 组报告质粒 pmHO-1Luc1（ho-1 基因启动子区pGL3-Basic）、pmHO-1Luc2（ho-1 基因启动子区和增强子区pGL3-Basic）、pmHO-1Luc3（ho-1 基因增强子区pGL3-Promoter）。转染重组质粒 pmHO-1Luc2、pmHO-1Luc3 的细胞中荧光素 酶活性大大增强，且预感染 Ad-DN-Egr-1-GFP 可显著降低其荧光素酶活性。以 上结果均说明 Egr-1 可调节 HO-1 的表达。基于之前的研究及文献报道，最后我们在人支气管上皮细胞（Beas-2b）中， 对四种黄酮类化合物（槲皮素、芸香苷、蒙花苷及山奈素）进行了初步的筛选工 作，以期望找到可能应用于 COPD 治疗的药物。结果发现，槲皮素和山奈素可对 CSE 导致的 Beas-2b 细胞凋亡产生保护作用，且槲皮素可能通过上调 HO-1 的表达水平而发挥功能，而山奈素的作用机理仍需进一步探索。 综上所述，我们的结果显示 CSE 可诱导细胞中 HO-1 的表达，而 Egr-1 可调节 CSE 诱导的 HO-1 表达。此外，治疗由香烟烟雾导致的 COPD 药物可能通过增加 HO-1 蛋白的水平发挥作用。关键词：HO-1Egr-1COPDCSE黄酮类化合物ABSTRACTHO-1（heme oxygenase-1, HO-1）is an inducible form of heme oxygenase, which can catalyze heme into biliverbin, CO and iron. Biliverdin is subsequently converted to bilirubin through the action of biliverdin reductase, and iron induces increased ferritin synthesis, then binds with it. HO-1 protein is maintained at a low level of expression under normal conditions, but the proper level of HO-1 expression may lessen the cell damage against the stress. It has been reported that the HO-1 protein level in pulmonary alveolar spaces of