fibulin5在肺癌中抑制wntβcatenin信号传导word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。  本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。  （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学博士学位论文  目的： 中文摘要 研究非小细胞肺癌（Non-small-cellcarcinoma NSCLC）的进展中 Fibulin-5 的 作用以及其可能的调控机制及相关信号通路。 方法： 1. 利用 Heatmap 分析肺癌基因图库 (The Cancer Genome Atlas TCGA)，并将肺 癌 RNA 序列及 DNA 甲基化数据与正常肺组织比对，并分析肺癌中 Fibulin-5 及 MMP-7（金属蛋白酶-7）以及 c-myc 的表达趋势。 2. 构建 Fibulin-5 表达工具质粒，利用转染技术转染入 A549 ，H1299 及 H460 细胞系中，利用集落形成试验分析 Fibulin-5 的作用。 3. 构建稳定转染 Fibulin-5 的 A549 及 H1299 细胞系，利用 MTT 生长曲线分析 方法分析 Fibulin-5 的作用。 4. 利用 WB 方法分析 A549 及 H1299 非小细胞肺癌细胞系细胞核中 Fibulin-5 与 β-catenin 表达水平。 5. SW480 和 H1752 细胞系中，分别过表达或敲除 Fibulin-5 后采用间接免疫荧 光的方法分析细胞系中 Fibulin-5 与 β-catenin 的表达。 6. 利用免疫组化分析对 99 例非小细胞肺癌(NSCLC) 标本进行 Fibulin-5 及 β-catenin 表达相关分析。 7. 构建 β-catenin 与 MMP-7 突变株，利用荧光素酶报告基因分析系统对转染 入 Fibulin-5 的 A549 及 H1299 细胞系进行 TCF-4 位点活性的分析。 8. 利用 WB 方法及 RT-PCR 方法对转染入 Fibulin-5 的 A549，H1299 和 H1752 细胞系进行 β-catenin，P-GSK-3β，MMP-7，c-myc 及 Cyclin-D1 表达水平趋 势的分析。 9. 构建 β-catenin shRNA 并转染入 A549 以及 H1299 细胞系，利用 WB 及细胞 侵袭实验方法分析 β-catenin，P-GSK-3β，MMP-7，c-myc 及 Cyclin-D1 表达 水平趋势。 10. 构建 GSK-3β 敲除 shRNA 并转染入稳定表达 Fibulin-5 的 A549 细胞系，利 用 WB 及细胞侵袭实验方法分析 β-catenin，P-GSK-3β，MMP-7，c-myc 及 Cyclin-D1 表达水平趋势。 11. 构建 RGD 序列缺失的 Fibulin-5 基因并转染入 A549，H1299 细胞系，利用 I  荧光素酶报告基因分析以及 WB 方法对 RGD 序列功能进行分析。 12. 利用免疫共沉淀方法对 Fibulin-5 与整合素 αvβ3 的结合进行分析。 13. 利用 WB 方法分析过表达 Fibulin-5 的 A549 及 H1299 细胞系中 Fibulin-5 与 整合素相关通路相关蛋白表达水平的关系。 14. 使用 ERK 抑制化合物 PD98059 对肺癌细胞系 A549 及 H129 中 ERK 的表达 进行抑制，通过 WB 分析 ERK 的表达和抑制与 P-GSK-3β 及 c-myc 的关系。 15. 将 30 只 BALB / c 裸鼠随机分为 6 组*5 只，通过尾静脉注射 1×106 个 H1299 细胞和稳定表达 Fibulin-5 的 H1299 细胞，0.2ml/只。接种 7 周后将裸鼠处 死，取肺组织测量结节直径并进行相关染色切片。 结果： 1. 通过与数据库中正常肺组织相比，肺癌细胞中 Fibulin-5 的表达水平明 显降低，其中 Fibulin-5 外显子