何首乌饮减轻aβ诱导的海马神经元损伤作用机制的分析word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 要 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种常见的中枢神经系统退行性疾病， 随着当今世界人口的老龄化，AD 发病率日益增高，世界上有 3500 多万人患有阿尔茨 海默病，并且患者的死亡率日益增加，因此有关此病的研究成为国内外的热点之一。阿 尔茨海默病其病理特征表现为神经细胞内出现神经纤维缠结（过度磷酸化的 Tau 蛋白 是其主要成分）以及细胞外存在老年斑，且主要分布在前皮质和海马区。老年斑的主要 成分是 Aβ (β-淀粉样蛋白)，是由β淀粉样前体蛋白（Amyloid prescursor protein APP）被 β 位 点 APP 裂解酶剪切所生成，Aβ 是 AD 患者发病的和病程进展的主要因素，聚合态的 Aβ 可导致神经细胞凋亡。细胞凋亡是海马神经元损伤的主要因素，已有研究表明以何首乌 为主药组成的多种中成药对大鼠的学习记忆有保护作用，广泛用于抗衰老。但何首乌饮 对 Aβ 诱导的海马神经元损伤的保护作用机制尚未见报道。 目的： 探讨何首乌饮对 Aβ 诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。 方法： 1. 采用新生 24 h 内的 SD 大鼠进行原代培养海马神经元 2. 将培养 10 d 的海马神经元分为以下五组：模型组：神经元培养 8 d 后，在培养液 中加入终浓度为 10 μmol/L 的 Aβ1-40 培养 48 h；何首乌饮保护组：神经元培养 6 d 后， 在培养液中加入 10%的何首乌饮含药血清，预处理 48 h，再加入终浓度为 10 μmol/L 的 Aβ1-40 培养 48 h；何首乌饮治疗组：神经元培养 6 d 后，再加入终浓度为 10 μmol/L 的 Aβ1-40 培养 48h，再在培养液中加入 10%的何首乌饮含药血清，处理 48 h；何首乌饮对 照组：神经元培养 8 d 后，10%的何首乌饮含药血清培养 48 h;空白对照组：神经元培养 10 d，不做任何处理。 3. 采用台盼蓝染色观察海马神经元存活率的变化：死细胞被染成蓝色，活细胞不着 色，用未染色活细胞总数在总细胞数中所占百分比来评价何首乌饮对 Aβ诱导的海马神 经元存活率的作用。 4. 采用 Hoechst33258 染色观察海马神经元的凋亡率：海马神经元培养 10 d 后进行 I II Hoechst33258 染色，在荧光显微镜下观察细胞的核染情况，随机选取 10 个视野，计数 细胞凋亡??。 5. 检测各组海马神经元 Trx1 的表达情况：免疫组化染色观察 Trx1 的表达；用 RT-PCR 检测各组 Trx1 的 mRNA 表水平，并用 Western blot 检测各组 Trx1 蛋白的水平。 结果： 1.细胞形态改变 空白对照组和何首乌饮对照组神经元生长旺盛，胞体大，边界 清楚，突起长，分枝连接呈网状；与正常组比较，模型组细胞贴壁不牢，失去原有形态， 胞体肿胀，细胞膜破裂，周围有许多细胞碎片，突起大部分断裂成断线状；何首乌饮治 疗组和预防组细胞状态与模型组相比较神经元的胞体较为完整，大部分细胞有突起，且 突起间有联接。 2.细胞存活率的变化 台盼蓝染色观察模型组存活率与空白对照组比较明显降低 （P0.05），何首乌饮治疗组和预防组与模型组比较存活率明显增高（P0.05），何首 乌饮治疗组和预防组与空白对照组比较没有显著性差异（P0.05），何首乌饮治疗组和 预防组比较也没有显著性差异（P0.05）。 3.Hoechst33258 染色 与空白对照组比较，模型组的凋亡率明显增加（P0.05）， 与模型组比较，何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低（P0.05）。何首乌饮治疗 组和预防组与空白对照组比较没有显著性差异（P0.05），何首乌饮治疗组和预防组比 较也没有显著性差异（P0.05）。 4.细胞免疫染色结果 Trx1 阳性物质呈棕色，位于细胞质。染色结果显示与空白 对照组比较，模型组 Trx1 的表达明显降低（P0.05）；与模型组比较，何首乌饮治疗 组和预防组 Trx1 表达明显升高（P0.05）,与空白组比较，何首乌饮治疗组和预防组 Trx1 的表达明显升高（P0.05），何首乌饮治疗组和何首乌饮预防组比较 Trx1 表达没有显 著性差异（P0.05）。 5.Trx1 蛋白和 mRNA 表达结果 何首乌饮治疗组、何首乌饮预防组明显高于模型 组（P0.05），模型组明显低于空白对照组（P0.05），治疗组和预防组之间没有差异 （P0.05），空白对照组和何首乌饮组之间也没有明显差异（P0.05）。 结论： 1. 何首乌饮能减轻 Aβ诱导的海马神经元的凋亡，对 Aβ致海马神经元的损伤有保护作  PAGE 3 用。 2. 何首