环磷酰胺对大鼠脑ir损伤的保护作用及海马gfap表达的影响word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 环磷酰胺对大鼠脑 I/R 损伤的保护作用 以及海马 GFAP 表达的影响 摘 要 目的： 通过研究环磷酰胺对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠海马区胶原纤维酸性 蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）以及皮层和海马区脑红蛋白（Neuroglobin， Ngb）的表达和神经元（Neuro）存活情况的影响，探讨环磷酰胺在缺血再灌注损 伤后对脑的保护作用及可能的作用机制。 方法： 健康成年 SD 雄性大鼠 72 只，体重 180~220g 之间，南华大学实验动物部提 供。随机分成四组，即正常对照组（正常组）、假手术组、模型对照组（模型组） 和环磷酰胺处理组（处理组），每组各 18 只，后三组（假手术组、模型组和处理 组）分别再按 24 小时、72 小时及 5 天三个时间点随机分组，每组 6 只。用 Longa 线栓法[1]经改良建立 SD 大鼠局灶性脑缺血模型。处理组缺血后 1 小时给予环磷 酰胺腹腔注射，模型组和假手术组均于术后 1 小时以等量生理盐水腹腔注射；处 理组和模型组均于缺血后 2 小时拔线形成再灌注，每组均按各自的时间点（24 小时、72 小时和 5 天）分别观察，并做 Longa 法神经功能评分，随后处死取脑， 正常组直接处死取脑。脑组织经石蜡包埋、切片后，行 HE 染色、Nissl 染色以 及应用免疫组织化学技术检测各组脑组织不同时段以及正常脑组织中的 GFAP、 TNF-α和 Ngb，光镜观察组织学变化，计算缺血侧大脑皮层神经元和海马区 GFAP、 TNF-α和 Ngb 阳性反应细胞。数据采用 SPSS13.0 统计软件进行多个样本均数比 较的配伍设计双因素方差分析，以 P＜0.05 或 P＜0.01 为显著性检验水准。 结果： 1.神经功能缺损评分 正常组和假手术组均为 0 分；治疗组神经功能评分明显轻于模型组，两组在 24 小时、72 小时、5 天三个不同时间点比较均有显著性差异（P＜0.05）。 HE 染色 正常组和假手术组皮层神经细胞形态正常，数量多，排列整齐。模型组神经 细胞稀疏，细胞间隙增大，并可见大量细胞变性坏死，表现为胞体皱缩，核固缩， 核仁消失；处理组神经细胞存活数量明显增多，损伤程度减轻。 Nissl 染色 正常组及假手术组皮层神经细胞膜呈蓝紫色??胞核呈饱满的淡蓝色，可见很 多紫蓝色的尼氏体，细胞排列整齐；模型组大鼠尼氏体溶解消失或很少，环磷酰 胺治疗后尼氏体明显增多。 .脑组织海马区 GFAP 的表达 模型组 24 小时后即可见 GFAP 阳性细胞少量分布于海马区，72 小时后增多， 而 5 天后达高峰。经过环磷酰胺处理后，海马区 GFAP 表达减少，分别与模型组 的同一时间点（24 小时、72 小时、5 天）比较，有统计学意义（P＜0.05）。而 假手术组和正常组海马区未见 GFAP 阳性细胞表达。 .脑组织海马区 TNF-α的表达 模型组与处理组各时间段均可见到 TNF-α的表达，在缺血后 24 小时最高， 随时间增长逐渐减少，正常组或者假手术组均未见到 TNF-α的表达。处理组与 模型组比较，24 小时及 72 小时后均有统计学意义（分别为 P＜0.01 和 P＜0.05）， 5 天后两组间比较无统计学意义。 .脑组织中 Ngb 的表达 正常组与假手术组中均可见到大鼠脑组织有 Ngb 的表达，两组间比较无统计 学意义；缺血再灌注后 Ngb 的表达明显增加，与正常组或假手术组比较，有统计 学意义（P＜0.05）；而环磷酰胺治疗后 Ngb 的表达进一步增加，与正常组或假 手术组比较，有统计学意义（P＜0.01），与模型组比较，有统计学意义（P＜0.05）。 结论 1 在脑缺血再灌注损伤模型大鼠中，环磷酰胺可减轻神经元变性坏死、抑 制星形胶质细胞的活化，使 GFAP 表达减少，并可抑制 TNF-α的表达，增加 Ngb 的表达，从而减轻脑缺血再灌注损伤，发挥脑保护作用。 2 环磷酰胺的神经保护作用机制可能与脑缺血再灌注损伤后抑制星形胶 质细胞活化、抑制 TNF-α表达、增加 Ngb、进而减轻脑缺血再灌注损伤后的炎症 级联反应有关。  关键词：脑缺血再灌注损伤；胶原纤维酸性蛋白；神经元；肿瘤坏死因子-α； 脑红蛋白；炎症级联反应；环磷酰胺；星形胶质细胞 Effect on the protection and the exression of GFAP of astrocytes in hippocampi treated by Cyclophosphamide after cerebral ischemia-reperfusion