第三章 细胞培养的设施与基本条件.pptVIP

细胞培养中除必需有培养基外，还用到各种各样的液体，包括水、平衡盐溶、消化液、缓冲液等。在组织培养中对这些液体都有一定的要求。 一、水 组织培养用的各种液体都是用水来配制，因此对水的质量要求很高，如水中含有杂质，会对细胞有不利影响，有些有毒特质和元素，即使含量极微，也可能引起细胞中毒以致死亡。因此组织培养用水需经过高度纯化。 二、平衡盐溶液（BSS） 平衡盐溶液（BSS）主要是由无机盐和葡萄糖组成，是细胞培养中常用的基本培养液体，可以维持渗透压、调节pH值以及供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。主要作为合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等。 平衡盐溶液的主要成分 ① 无机盐：无机盐不仅是细胞生命所需成分，而且在维持 渗透压，缓冲和调节溶液的酸碱度方面起重要作用。 ② 葡萄糖：供给能量用。 ③ 酚 红：酸碱度变化的指示剂。酸：黄色；中：桃红； 碱：红色。 平衡盐溶液的作用 ① 作为稀释和灌注的液体，维持细胞渗透压。 ② 提供缓冲系统，使培养液的酸碱度维持在培养细胞 生理范围内。 ③ 提供细胞正常代谢所需的能量、水分和无机离子。 ④ 用来冲洗组织和细胞。 ⑤ 配制各种培养液的基础溶液。 常用的几种平衡盐溶液 Hanks液 A．10?母液配制法 甲液：取450ml三蒸水依次溶解下列试剂 NaCl 80g KCl 4g MgSO4?7H2O 2g CaCl2 1.4g（2H2O者1.85g） 待完全溶解后，补足三蒸水至500ml。 乙液：取450ml三蒸水依次溶解下列试剂 Na2HPO4 0.6g（12H2O者1.52g） KH2PO4 0.6g 葡萄糖 10g 0.4%酚红 50ml 待完全溶解后，补足三蒸水至500ml。 B．Hanks使用液的配制 取上述甲、乙液等量用三蒸水稀释10倍，即成使用液。用前高压灭菌。 PBS液 可配成含0.85%NaCl，pH7.2的PBS（简称pH7.2PBS） A．PBS贮存液的配法（10?） NaCl 8.5g KCl 0.2g Na2HPO4?12H2O 2.85g （或Na2HPO4?2H2O 1.13g） KH2PO4 0.27g 三蒸水 100ml B．PBS应用液的配制 取贮存液50ml加三蒸水450ml即成，经103kPa（121.3℃）15min灭菌，置室温或4℃保存备用。 平衡盐溶液配制注意事项 ① 试剂要纯正 优级纯（GR） 绿色 分析纯（AR） 红色 化学纯（CP） 蓝色 生物试剂（BR） ② 药品要依次溶解。 ③ 灭菌时压力不要超过10磅，10—15分钟。 ④ CaCl和MgSO4易潮解（潮解的不能用）。 三、消化液 主要用于分离组织和分散细胞，常用的有胰蛋白酶（0.25%）和二乙烯四乙酸钠（EDTA）两种溶液。 1 胰蛋白酶溶液 胰蛋白酶溶液的配制： ①用少量的D-Hanks液先把胰蛋白酶粉调成糊状； ②补足D-Hanks液，振摇混均，置4℃冰箱内过夜； ③次日溶解后，用滤纸过滤； ④滤液再经过玻璃滤器滤过除菌； ⑤分装入小瓶，低温冰箱或普通冰箱冰冻保存； ⑥使用时用NaHCO3调节pH至7.0。 2 EDTA溶液 是一种化学螯合剂，对细胞有一定的解离作用，并且毒性小，使用方便。使用的浓度是0.02%，用D-Hanks液溶解后10磅15分钟高压灭菌，分装小瓶，4℃冰箱保存。 四、pH调整液 1.NaHCO3 7.4%、5.6%、3.7%三种浓度常用。 配制方法：三蒸水溶解 玻璃滤器过滤除菌 分装