武汉大学分析化学课件_第21章_毛细管电泳与毛细管电色谱.ppt

21.3.1. 毛细管区带电泳（CZE） 在CZE分离中，除了背景电解质外，常常还在缓冲溶液中加入某些添加剂： 1.中性盐 2. 表面活性剂 3. 手性添加剂 对于许多水难溶的样品，如果在缓冲液中加入少量的有机溶剂，常常能有效改善分离度。在极端情况下，可完全使用有机溶剂，或以有机溶剂为主体，这就是非水毛细管电泳技术。 图21-6 电渗流反向示意图 21.3.1. 毛细管区带电泳（CZE） 21.3.1.2. 应用 毛细管区带电泳特别适合分离带电化合物，包括无机阴离子、无机阳离子、有机酸、胺类化合物、氨基酸、蛋白质等，不能分离中性化合物。 毛细管区带电泳3分钟内分离30种阴离子电泳图 21.3.2. 胶束电动毛细管色谱（MEKC） MEKC是在电泳缓冲溶液中加入表面活性剂，当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时，表面活性剂分子之间的疏水基团聚集在一起形成胶束，成为分离体系的准固定相，溶质基于在水相和胶束相之间的分配系数不同而得到分离。 21.3.2. 胶束电动毛细管色谱（MEKC） MEKC是在电泳缓冲溶液中加入表面活性剂，当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时，表面活性剂分子之间的疏水基团聚集在一起形成胶束，成为分离体系的准固定相，溶质基于在水相和胶束相之间的分配系数不同而得到分离。 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 可用来分离中性物质 色谱与电泳分离模式的结合。 21.3.3. 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis;CGE)是在毛细管中充填多孔凝胶作为支持介质进行电泳，其分离是基于筛分机理。 CGE常用于蛋白质，寡聚核苷酸、RNA及DNA片段的分离和测定。 凝胶是毛细管电泳的理想介质，粘度大，抗对流，能减少溶质的扩散，因此能限制谱带的展宽，所得的峰型尖锐，柱效高，有可能使组分在短柱上实现极好的分离。 常用的凝胶有聚丙烯酰胺和琼脂糖，应用最多的是前者。 21.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 21.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离。 21.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离。 21.3.5. 毛细管等速电泳（CITP） 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强