第一部分第二章 蛋白质的二维结晶及结构重建 生物物理学课件技术方案.pptVIP

第二章 蛋白质的二维结晶及结构重建;Protein crystals;Protein crystals ;Crystals of Satellite Tobacco Mosaic Virus (STMV) ;电子晶体学的发展历程; 最近十几年来，随着计算机图象处理技术、电子显微镜技术及生物样品二维结晶技术的发展和完善，电子晶体学已发展成为一种X射线晶体学不可替代的生物大分子空间结构分析的有效手段。 通过二维晶体和电子晶体学方法研究蛋白质（膜蛋白）的结构在未来可能会有更大的发展。 ;2.1 蛋白质晶体的类型;二维晶体; 所有的蛋白在脂双层中都有相同的取向； 蛋白分子以相互间隔的取向排列， 膜的两侧性质是相同的；;二维晶垛;三维晶体;２.２蛋白质的二维结晶化;去垢剂－蛋白微团的二维结晶化;脂单层表面的二维结晶化;LB膜;在含有去垢剂的溶液中，脂和膜蛋白的疏水部分被包埋在去垢剂微团的疏水内部。用透析或吸附的方法除去去垢剂，脂分子自组装成双层膜结构，膜蛋白分子要么插入膜中，要么自我聚集。 那种暴露在膜外的体积较小的膜蛋白分子可能更倾向于插入双层膜，然而具有较大的亲水体积的膜蛋白可能倾向于聚集。　; 影响二维晶体形成的因素;2.4 电镜观察与三维结构重建;电镜 ;电镜样品制备;三维结构重建的梗概;电镜照片的数字化; 与三维晶体的x衍射晶体学比较，生物大分子的二维结晶及电镜重构技术有几个显著优点： ①许多蛋白质(特别是膜蛋白)可能更容易形成二维晶体。对于蛋白质难于长出适合于x射线晶体分析的三维晶体的情况，二维晶体及电镜的三维重构无疑是对生物大分子结构分析的重要补充。 ②由电子显微图象的傅里叶变换可以直接测定结构因子的相位，所以不需要制备蛋白质的重原子衍生物。而且，由电镜显微图象得到的相位质量高于由同晶置换法得到的x射线晶体学中的相位。 ③蛋白质二维晶体的组装是一个比三维结晶更便于人工控制的进程。二 维晶体的形成过程甚至于可以原位监测。对于二维晶体形成过程涉及的大量的脂类—蛋白，蛋白—蛋白相互作用的问题的研究本身，就可能获得阶段性成果。 ④二维结??化技术可能更适合于生物大分子复合体系的结构研究。 ;冷冻电镜（Cryo-EM）; Thanks！