哮喘造模成功.doc

糖皮质激素与甘利欣对哮喘发作治疗的疗效比较 郭兴华　王敏仪　庄圆　于亚楠　高鸿鹍 　麦赞 指导老师:刘清华 [摘要] 目的：探讨甘利欣及糖皮质激素对发作期哮喘的疗效比较。方法：将24只豚鼠分为空白对照组、氢化可的松组、甘利欣组。哮喘模型用腹腔注射鸡蛋清致敏豚鼠并滴鼻激发。模型建立成功指标采用记录豚鼠打喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、肺泡灌洗液(BALF)细胞计数。结果：空白对照组豚鼠打喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、白细胞增多。氢化可的松组打喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、白细胞减少。甘利欣组打喷嚏数、鼻痒抓鼻次数、白细胞减少。结论：甘利欣能改善豚鼠哮喘模型症状及减少肺泡灌洗液白细胞数。 [关键词] 甘利欣；氢化可的松；哮喘；豚鼠；白细胞数 1 引言 支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的支气管非特异性炎症。这种炎症易使易感者对各种激发因子具有气道高反应性，并可引起支气管收缩、狭窄，粘液分泌增多，表现为喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状。支气管哮喘可发生于任何年龄。有资料表明，全世界约有1亿哮喘患者，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病。 支气管哮喘的病因较复杂，大多认为是一种多基因遗传病，受遗传因素和环境因素的影响。其发病与变态反应有关，已被公认的主要是Ⅰ型变态反应，患者多为特异性体质，常伴有其他过敏性疾病，当机体接触某些致敏物质（抗原）后，便产生特异性抗体，以后若再接触同一抗原，即可发生抗原抗体反应，导致哮喘发作。其发病与过敏反应有密切联系，可用嗜酸细胞计数作为指征。1 目前对支气管哮喘严重急性发作时，主要使用糖皮质激素抢救，但长期应用其不良反应较多。现有文献报道中成药甘利欣对支气管哮喘有治疗作用。目前国内外在用甘利欣治疗支气管哮喘方面研究甚少，本实验应用此药与糖皮质激素作用于豚鼠哮喘模型试图讨论其对支气管哮喘发作的疗效对比。 2 材料与方法 2．1 材料 （1）豚鼠24只，雌雄各半，体重230g~330g。由中山大学北校区动物中心提供。 （2）鸡蛋14只，为广州市胜佳东川分店产品；橄榄油一瓶（50ml），在千色店购买；Wright染色剂，诊基教研室提供；氢化考的松针剂3支，天津金耀氨基酸有限公司，批号0403121，规格5ml:25mg；甘利欣针（规格：10ml:50mg）2支，中山大学第一附属医院购买；盐酸异丙嗪（注射剂），天津金耀氨基酸有限公司，批号0312111，规格2ml:50mg；生理盐水2L，中山大学北校区实验生理教研室提供。 （3）玻片50张；普通手术器械。 2．2 方法 2．2．1将30只豚鼠做成哮喘模型：在第1d，3d，5d分别给予腹腔注射鸡蛋清2ml/只致敏豚鼠。在第7天，激发前给豚鼠腹腔注射盐酸异丙嗪（注射剂）25mg/kg防止过度反应所致死亡2，后将以1：1溶于橄榄油的鸡蛋清（0.04ml/100g）给致敏豚鼠滴鼻，进行激发，使动物出现哮喘样发作，以豚鼠出现痉挛性腹式呼吸为哮喘发作指征。从滴鼻开始至哮喘发作的时间为引哮喘伏期，引哮喘伏期小于360s为造模成功3。 2．2．2将豚鼠随机分成三组（空白对照组、氢化可的松（即糖皮质激素）组、甘利欣组），每组8只，雌雄各半。分别进行如下处理：以0.04ml/kg体重生理盐水静脉注射、以氢化考的松针剂静脉注射（药理剂量：成人每次静注25mg，即豚鼠服用剂量325/60*5.26/1.00 mg/kg =2.2mg/kg）、甘利欣针剂静脉注射（成人每次静注10ml(剂型：10ml:50mg），因此豚鼠剂量310/60*5.26/1.00ml/kg=0.88ml/kg）。给药后观察30min内打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数。给药3小时后处死豚鼠，开胸，结扎左主支气管，用钝长针头插入右侧主支气管，行支气管肺泡灌洗，每次缓慢注入6 ml生理盐水,保留20s后回抽，重复3次，回收BALF约4ml4。摇匀，取BALF做白细胞计数5以评价炎性反应程度。取3mlBALF离心2500r，5min，弃上清，加生理盐水1ml，浑匀，取少许推片，Wright染色6，高倍镜下计数嗜酸性粒细胞比例，以评价过敏反应程度。 2．3观察指标 豚鼠打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数，BALF中白细胞数目、嗜酸性粒细胞数目。 2．4数据统计 用EXCEL软件对三组实验数据进行统计。 3 结果： 3．1各组豚鼠激发后行为变化 空白对照组在激发后出现明显鼻部瘙痒，进而呼吸加深、加快，少动，点头呼吸，呈哮喘样表现；氢化可的松组、甘利欣组在激发给药后6~8分钟症状明显减轻，表现为点头呼吸消失，运动增多。7 3．2 打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数 ? 空白对照组 氢化可的松组 甘利欣组 ? 打喷嚏 抓痒 打喷嚏 抓痒 打喷嚏 抓痒 1 1 38