第一章培养室的基本设备和.ppt

植物组织培养 绪论 第一章 实验室设备和一般技术 第二章 培养基及其配制 第三章 外植体的选择和灭菌 第四章 外植体的接种和培养 第五章 细胞的全能性与器官发生 第六章 器官培养 第七章 体细胞胚胎 发生 第八章 植物脱毒技术 第九章 离体无性快速繁殖方法 第十章 单倍体的产生 第十一章 三倍体的产生 第十二章 离体授粉 第十三章 合子胚培养 第十四章 细胞培养 第十五章 原生质体的分离和培养 第十六章 体细胞杂交 第十七章 种质贮存 第十八章 体细胞遗传学研究 绪论 一、概念 广义的组织培养（组培）（plant tissue culture)，指在无菌条件下利用人工培养基对植物的组织、器官、细胞和原生质体进行培养的一门技术。 根据所培养培养的植物材料的不同，可把组培分为五种类型：即愈伤组织培养、悬浮细胞培养、器官培养（胚、花药、子房、根、茎和叶的培养等）、茎尖分生组织培养和原生质体培养。 愈伤组织(callus)——指在组织培养中，由外植体长出来的一团无形态和功能分化的薄壁组织。原来是指植物在受伤后表面长出的一团薄壁细胞。 分化(differentiation)——指由具有分生能力的还没有形态和功能分化的组织（如分生组织、愈伤组织等）朝着不同的发育方向发展，产生了不同的组织和器官的现象。 脱分化(dedifferentiation)——指已经成熟的已分化细胞（组织）在一定条件的刺激下又恢复了分生能力的现象。比如成熟组织上形成了愈伤组织。 再分化(redifferentiation)——指脱分化的 组织再次分化出新的组织或器官的现象。 外植体(explant)——用来进行组织培养的离体植物接种材料。 细胞的全能性（totipotent)——任何具有完整的细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。 二、植物组织培养的发展历史 1.探索阶段——20世纪初，在德国植物学Schleiden和Schwann的细胞学说的推动下，德国植物生理学家Haberlandt提出了高等植物器官和组织可以不断分割，直至分到单个细胞的观点，并设想离体细胞具有再生完整植株的潜力。但没有成功，直到1934年White培养番茄离体根尖的成功，在此32年中，一直处于探索阶段，进展不大。 2.奠基阶段——即20世纪30年代中至50年代。在此期间，有两个重要发现：一是认识了B族维生素对植物生长的重要意义；二是发现了生长素和细胞分裂素是一种天然的生长调节剂。 3.迅速发展阶段——20世纪60年代至今。表现在基础研究再奏凯歌，烟草髓部单细胞获得完整再生植株；原生质体培养取得重大突破；花药培养取得显著成绩；微繁技术得到广泛应用。 三、组培在农、林业上的应用 1.快速繁殖 2.可获得去病毒植株 3.组培是转基因技术不可或缺的组成部分，无论是转基因受体的提供，还是转化细胞的筛选和再生，都需要组培技术作为支撑。 4.克服远缘杂交的不亲和性 5.缩短常规育种的时间 6.次生代谢物的获得 第一章组培室的基本设备和一般技术 （一）实验室设计与要求 现以一个年产4万～20万株苗的小规模实验室为例，要求有2～3间实验用房，其总面积不应少于40－60m2。房间可划分为准备室、培养室和无菌操作室。 1.准备室 要求20m2，明亮，通风。准备室的任务很繁重，要完成器皿洗涤、培养基配制、分装、包扎、高压灭菌，还有试管苗的出瓶、清洗与整理工作。本室应由1～2名熟练工来操作。 （1）100－200L电冰箱1台，用以贮存易变质、易分解药品及各种母液。 （2）高压灭菌锅，手提式需2－3个，中型立式只需1个，手提式快捷方便，但容量少，不能满足大规模培养，如年产百万株苗则应选大型卧式灭菌锅。 （3）煮培养基的电炉或煤气炉，不锈钢锅或医用搪瓷杯。 （4）水槽 （5）工作台 （6）药品柜、搁架，用于存放药品、玻璃瓶等。 （7）干燥箱一个，用于玻璃器皿的干燥。 （8）蒸馏水器 （9）酸度计或pH计 （10）1/1000电子天平1部。 （11）培养器皿 （12）下口杯，用于分装培养基，注意：1000ml热培养基应定容到约1100ml。 （13）试剂瓶 1000ml,500ml,250ml棕色瓶各5个，白色5个，100ml滴瓶10个，100ml试剂瓶20个。 （14）移液管 10ml，5ml，2ml,1ml各5支。 （15）量筒 1000ml2只，500ml2只，100ml4只，50ml4只。 （16）烧杯 1000ml, 500ml ,250ml, 100ml各10只。 （17）容量瓶 1000ml, 500